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氧化应激和高血压的发生发展密切相关,降低氧化应激水平能显著改善血压。针灸治疗能改善血压及相关临床症状,但其作用机制仍不明确。 目的: 针刺治疗SHR模型大鼠2周,采用DHE染色法、光泽精化学发光法、Western blotting和PCR等方法,明确针刺对SHR大鼠NADPH氧化酶的影响,阐明针刺改善SHR大鼠血压的机制,从而揭示针灸的抗氧化机制,为高血压的治疗提供新的思路。 方法: 1.高血压模型制备:SHR大鼠72只,随机分为模型组、针刺组和非穴组;24只WKY大鼠作为正常组。 2.针刺方法:针刺组,取双侧太冲穴(定位在大鼠后肢足背侧第1、2跖骨间),行捻转泻法(捻转角度>180度,每分钟<60次)。非穴组取固定非穴点(定位在大鼠后肢足背侧第3、4跖骨间凹陷处),作为对照刺激点,用平补平泻手法(捻转角度90-180度,每分钟60-120次)。每日1次,每次30s,不留针,治疗6 d,休息1 d,2周共治疗12次。模型组和正常组进行与针刺组和非穴组相同时间、相同力度的捉抓刺激。 3.血压和心率检测:采用无线遥测技术测量大鼠的血压和心率。 4.ROS水平测定:采用DHE染色方法检测延髓头端腹外侧中ROS水平。 5.NADPH氧化酶活性测定:采用光泽精化学发光法检测NADPH氧化酶活性。 6.NADPH氧化酶亚基测定:采用Western blotting和PCR检测NADPH氧化酶质膜亚基和胞浆亚基蛋白和mRNA表达水平。 7.统计学分析:所有数据都以平均值±标准误表示。血压、心率数据采用重复测量的双因素方差分析,各组即刻效应的比较采用配对t检验,各时间点组间两两比较用多元方差分析;其他数据组间均数比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA);p<0.05认为差异有统计学意义。 结果: 1.针刺可以下降SHR大鼠的血压和心率:与正常组比较,模型组SHR大鼠血压显著升高,心率显著加快(p<0.01);与模型组和非穴组比较,针刺下降SHR大鼠的血压和心率(p<0.05)。 2.针刺可以降低ROS含量:与正常组比较,模型组ROS荧光强度显著升高;与模型组和非穴组比较,针刺组延髓头端腹外侧ROS荧光强度显著减弱(p<0.01)。 3.针刺可以降低NADPH氧化酶活性:与正常组比较,模型组大鼠NADPH氧化酶活性显著升高;与模型组和非穴组比较,针刺组大鼠NADPH氧化酶活性显著降低(p<0.05)。 4.针刺可以下调NADPH氧化酶亚基gp91phox表达:与正常组比较,模型组大鼠NADPH氧化酶胞膜和胞质亚基蛋白表达显著升高(p<0.05);与模型组和非穴组比较,针刺下降大鼠胞膜亚基gp91phox蛋白表达(p<0.05);与模型组比较,非穴组gp91phox蛋白表达未见显著改变。与正常组比较,SHR大鼠NADPH氧化酶亚基gp91phox mRNA水平显著升高;与模型组和非穴组比较,针刺下降gp91phox mRNA表达水平(p<0.05);模型组和非穴组比较无显著差异(p>0.05)。 结论: 1.SHR大鼠血压升高,心率加快,针刺可以下降高血压大鼠血压和心率。 2.SHR大鼠ROS水平显著增加,NADPH氧化酶活性显著升高,针刺可以降低自发高血压大鼠ROS水平和NADPH氧化酶活性。 3.SHR大鼠延髓头端腹外侧NADPH氧化酶多种亚基表达上调,针刺可以显著下调gp91phox的表达水平。 综上所述,高血压大鼠血压升高、心率加快,ROS水平和NADPH氧化酶活性显著上调。针刺可通过下调延髓头端腹外侧NADPH氧化酶亚基gp91phox表达,抑制NADPH氧化酶活性,降低氧化应激水平,改善SHR大鼠的血压和心率。本研究为今后针刺治疗高血压的机制研究提供新的实验依据,同时也为临床治疗高血压提供新的视角。