论文部分内容阅读
目的:
1．了解温州医学院附属第一医院临床分离鲍曼不动杆菌的分布情况及耐药特性，为临床抗菌药物选择提供依据。
2．研究临床分离鲍曼不动杆菌的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC)及部分碳青霉烯酶基因的产生情况和基因分布特征，分析不同基因型的耐药特性及其与β-内酰胺类抗菌药物耐药的相关性。
3．研究产ESBLs菌株的同源性，为控制耐药性的传播提供依据。
方法:
1．回顾性调查临床分离鲍曼不动杆菌的临床感染分布特点，VITEK-60全自动微生物分析仪和K-B纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌对亚胺培南、头孢他啶、头孢曲松、头孢唑林、氨苄西林、环丙沙星、妥布霉素、庆大霉素、复方新诺明、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的耐药性并分析其变迁情况。
2．PCR筛选215株鲍曼不动杆菌中ESBLs耐药基因(TEM，SHV，VEB，PER,GES,TLA,IBC,CTX-M-1,CTX-M-2,CTX-M-8,CTX-M-9,OXAI，OXAⅡ，OXAⅢ，OXAⅣ和OXAⅤ)、AmpC耐药基因(ADC，DHA，EBC，ACC，CIT，MOX，FOX，CARB)及碳青霉烯酶耐药基因(OXA-23，NDM-1)等，阳性产物进行DNA测序以确定基因型；接合转移试验探讨ESBLs耐药基因的转移性；质粒提取与PCR扩增实验对ESBLs进行基因定位。
3．运用脉冲场电泳(PFGE)技术分析产ESBLs菌株的同源性情况。
结果:
1．本研究中215株鲍曼不动杆菌主要来源于痰液标本，占93.0％(200/215)其次为引流液1.9％(4/215)，血液1.4％(3/215)，伤口1.4％(3/215)等；其中67.9％(146/215)来自于监护病房患者，13.5(29/215)来自于呼吸内科患者，其他病房患者占18.6％。
2．临床常用药物中，敏感性最好的为头孢哌酮/舒巴坦(敏感率为54.1％)其次为亚胺培南(敏感率为46.4％)，耐药率最高的为头孢唑林(不敏感率为99.9％)和氨苄西林(不敏感率为98.6％)，其次为头孢曲松(不敏感率为94.4％)；庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、复方新诺明均处于较高耐药水平(不敏感率均在60％以上)；其中耐药性具明显上升趋势的有头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦，与近年来碳青霉烯类抗生素和酶抑制剂类抗生素的广泛应用有关。215株鲍曼不动杆菌对所有β-内酰胺类药物包括头孢他啶、头孢曲松、头孢唑林和氨苄西林的不敏感率均处于80％以上的高水平，耐药现象严重。
3.215株鲍曼不动杆菌中，PCR方法检测出57株ESBLs阳性，阳性率为26.5％，包括PER40株(18.6％)，TEM16株(7.4％)，SHV4株(1.9％)，CTX-M-14株(1.9％)和OXAⅡ3株(1.4％)，其中8株同时携带PER，TEM基因，1株同时携带CTX-M-1和OXAⅡ基因；经BLAST比对分析，基因型包括PER-1，TEM-1，SHV-1，CTX-M-15，CTX-M-22和OXA-21;未检测到VEB、GES、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、TLA、IBC、OXA-10、OXAI、OXAⅢ、OXAIV、OXAV等基因；104株检测出AmpC基因，阳性率为48.4％(104/215)，其中ADC阳性82株，占38.1％，DHA、EBC、ACC、CIT基因阳性株分别为35株(16.3％)，8株(3.7％)，3株(1.4％)和1株(0.5％)，同时携带ADC、DHA基因21株，同时携带ADC、DHA和EBC基因3株，同时携带EBC、ADC基因2株，未检测到MOX、FOX、CARB基因，随机选取一株ADC阳性基因进行测序，经BLAST比对，基因型为ADC-25；检出OXA-23阳性107株，占49.8％；另外，本研究发现1株携带NDM-1基因的鲍曼不动杆菌。
4．ESBLs阳性菌株接合转移试验均未见接合子生长，接合试验阴性。
5．对部分ESBLs阳性菌株提取质粒、PCR扩增，发现所有基因均位于质粒上。
6．通过PFGE分析，15株PER型ESBLs阳性的鲍曼不动杆菌中，共分成A、B、C3个克隆。其中有13株属于A克隆，主要分布在监护病房，其他病区包括脑外、神外、烧伤/创伤、观察室和呼吸内科，提示同一克隆株在相同病区和不同病区之间均存在不同程度的克隆播散，说明本院PER型ESBLs流行株克隆播散现象严重。
结论:
1．所测215株鲍曼不动杆菌仅对少数抗菌药物敏感性稍高，对大多数抗菌药物尤其β-内酰胺类呈现较高的耐药性，且耐药性有明显上升趋势，耐药现象严重。
2.215株鲍曼不动杆菌ESBLs基因型以PER为主，通过PFGE可知，其流行的主要形式为克隆播散，TEM、CTX-M-1、SHV、OXAⅡ等ESBLs基因都有检出；AmpC基因型以ADC为主，DHA、EBC、ACC、CIT也都有检出。
3．鲍曼不动杆菌ESBLs阳性基因大多数位于质粒上。
4.123株对碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌中，99株携带OXA-23型β-内酰胺酶基因，占80.5％(99/123)，说明产OXA-23型β-内酰胺酶是本院鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。
5.1株携带NDM-1基因的鲍曼不动杆菌，质粒定位试验表明该基因位于约18kb的质粒上；此株细菌同时携带OXA-23和IMP型碳青霉烯酶基因。