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目的 在中医理论指导下,建立及评价阳气虚衰HF大鼠模型;通过参附药对不同配比对阳气虚衰HF大鼠模型血流动力学和心肌组织病理学检查,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺素(TSH)、醛固酮(ALD)、脑钠素(BNP)的含量,筛选参附药对改善心衰的最佳配比。以寻求复方药对配伍作用机制有效的现代研究方法和途径,阐明参附药对配伍的药效有效成分与疗效关系。方法1.阳气虚衰HF大鼠模型的建立及评价采用狭窄大鼠腹主动脉法,通过一般状态观察、体重变化、呼吸、心率、体温的测定,并建立阳气虚衰HF大鼠模型的中医症候诊断标准,用以评价模型是否稳定可靠;2.参附药对的提取及含量检测采用水煎煮法提取不同比例参附药对,获得含生药1g.g-1的浸膏。在本团队前期研究基础上,采用HPLC测定各组提取物中人参皂苷Rg1、Re、Rb1,新乌头碱、乌头碱、次乌头碱等指标性成分含量;3.参附药对改善阳气虚衰HF大鼠的最佳配比研究3.1取术后7天存活的阳气虚衰HF模型大鼠,按参附药对配比分为1:0.1、1:0.5、1:1、1:2、1:10五组,同时设置红参组、附子组、手术组和假手术组,共9组,按每天100mg·kg-1鼠重灌胃给药42天,手术组和假手术组灌服等剂量的生理盐水;3.2给药后第43天称重,测定大鼠血流动力学参数指标[心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室等容期压力变化最大速率(±dp/dtmax)];3.3取各组大鼠心脏进行称重,观察病变情况,计算心重指数(HWI)。取左室游离壁,用10%甲醛固定,乙醇脱水,二甲苯透化,石蜡包埋,常规切片(厚度4μm),HE染色,在光学显微镜下观察心肌组织病变情况;3.4颈动脉取血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺素(TSH)、醛固酮(ALD)、脑钠素(BNP)等指标的含量水平。结果1.手术狭窄腹主动脉法建立阳气虚衰HF大鼠模型,出现了心阳虚的症状和体征,活动量和进食量均减少,体温降低,呼吸频率及心率明显加快。建立了阳气虚衰HF大鼠模型中医证候诊断标准,并将其成功用于心阳虚大鼠模型的评价;2.对不同配比参附药对采用HPLC法进行指标性成分检测,结果表明人参皂苷组分中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量:①参附1:0.1组分别为:4.89117mg·g-1、2.87235mg·g-1、5.25666mg·g-1;②参附 1:0.5 组分别为4.67170mg·g-1、2.64362mg·g-1、5.02338mg·g-1;③参附 1:1 组分别为3.78647mg·g-1、1.97884mg·g-1、4.12102mg·g-1;④参附 1:2 组分别为3.39821mg·g-1、1.83017mg·g-1、3.73337mg·g-1;⑤参附 1:10 组分别为 1.82816mg·g-1、0.88876mg·g-1、2.15275mg·g-1;⑥红参组分别为5.70939mg·g-1、3.47431mg·g-1、6.11699mg·g-1。乌头类生物碱组分中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱含量:①参附1:0.1组三种乌头碱类成分使用该HPLC法均检测不到;②参附1:0.5组乌头碱成分检测不到,新乌头碱为0.03794mg·g-1,次乌头碱为0.04515mg·g-1;③参附1:1组乌头碱成分检测不到,新乌头碱为0.05137mg·g-1、次乌头碱为0.09998mg·g-1;④参附 1:2 组分别为 0.09387mg·g-1、0.04597mg·g-1、0.19844mg·g-1;⑤参附 1:10 组分别为 0.20124mg·g-1、0.08812mg·g-1、0.50819 mg·g-1;⑥附子组分别为 0.35238mg·g-1、0.12231mg·g-1、0.78532 mg·g-1。3.参附药对改善阳气虚衰HF大鼠的最佳配比研究3.1根据阳气虚衰HF大鼠模型中医证候诊断标准,对各组大鼠症候进行判断,结果表明,不同配比参附药对疗效排序为:参附药对1:10组>参附药对1:0.5组≈附子组>参附药对1:1组≈参附药对1:2组≈红参组>参附药对1:0.1组;3.2参附药对能不同程度地改善阳气虚衰HF大鼠血流动力学指标,降低心率(HR)和左室舒张末压(LVEDP),升高左室收缩压(LVSP)、左心室压力变化最大速率(±dp/dt),其疗效强弱排序如下:参附药对1:10组>红参组≈附子组>参附药对1:0.5组>参附药对1:1组≈参附药对1:2组>参附药对1:0.1组;3.3参附药对对大鼠心重指数、心脏病理学切片等的影响可以看出,不同配比参附药对改善心力衰竭具有一定的治疗效果且疗效排序为:参附药对1:10组>参附药对1:0.5组≈附子组>参附药对1:1组≈参附药对1:2组≈红参组>参附药对1:0.1组;3.4不同配比参附药对能有效提高大鼠血清中T3、T4、TSH水平且排序为:参附药对1:10组>参附药对1:0.5组≈附子组≈红参组>参附药对1:1组≈参附药对1:2组>参附药对1:0.1组;不同配比参附药对能有效抑制大鼠血清中ALD、BNP水平且排序为:参附药对1:10组≈参附药对1:0.5组>参附药对1:1组≈附子组≈红参组>参附药对1:2组≈参附药对1:0.1组。结论1.成功建立了阳气虚衰HF大鼠模型及其评价标准。结果表明,在狭窄腹主动脉术后加重了大鼠心衰症状,并体现了中医中“阳虚”的症候;建立相应的阳气虚衰HF大鼠模型的中医症候诊断标准,以阳虚表现为主症,以“心”的症状为次证,即体现了阳虚症候,又体现了脏腑定位。用大鼠体温,呼吸频率和心率等可量化的指标来表示主症症状更为客观和科学。2.不同配比参附药对改善阳气虚衰HF大鼠均具有治疗效果,其中以参附药对1:10组的疗效最佳。对其作用机制进行初步探讨:不同配比参附药对都能不同程度地改善阳气虚衰HF大鼠血流动力学指标,降低心率(HR)和左室舒张末压(LVEDP),升高左室收缩压(LVSP)、左心室压力变化最大速率(±dp/dt),改善心脏收缩舒张功能,可以慢慢修复受损的心肌组织,提高大鼠血清中T3、T4、TSH水平,并有效抑制大鼠血清中ALD、BNP水平,从而起到治疗阳气虚衰HF的作用。3.参附药对1:10组,以附子为君药,辅以红参配伍,即提高了人参皂苷的溶出度,又降低了附子中乌头碱类成分的含量,起到了中药复方增效减毒的目的,更有效增强了其改善阳气虚衰型心衰的效果,故疗效明显优于其余配比参附药对及各拆方组。