益母草药材产地加工与饮片炮制生产一体化工艺研究

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益母草为常用中药,历代本草均有收载,主要含有生物碱类、黄酮类、二萜类、挥发油类等化合物。药理研究表明,益母草有收缩子宫、抑制血小板聚集等广泛的作用。临床上主要用于月经不调、行经腹痛及产后瘀阻等症。益母草质地疏松,易于切制,但贮藏及运输不便,且有效成分易随水流失。通过将产地加工和炮制进行整和,可以通过减少水处理步骤,控制干燥的温度和时间,从而保证饮片的质量,建立、形成具有优化生产环节、便于贮藏运输、降低成本等优势的产地加工与炮制生产一体化的工艺技术和规范。根据益母草宜采用产地加工技术、传统炮制技术及产地加工与炮制一体化生产饮片的比较性研究。建立体现中药安全、有效及可控性的评价质量体系。本文运用现代的分析技术与方法,初步建立益母草中生物碱类、黄酮类、无机元素的分析与评价方法,探讨了不同干燥方式对益母草中的有效成份与无机元素的影响,运用网络药理学方法通过构建"药物-靶点-疾病"网络,全面系统预测益母草生物碱类成分的潜在作用靶点,分析其作用机制。为益母草质量标准的提升及生物活性的研究,提供科学合理的理论依据。生物碱类和黄酮类成分的分析:建立了益母草生物碱类与黄酮类成分的反相高效液相含量测定方法。以甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相等度洗脱,流速控制在1.0mL·min-1,柱温:30℃,在检测波长为270 nm的条件下,益母草碱、芦丁、槲皮素、芹菜素、芫花素均能够达到基线分离;以乙腈-水(80:20),流速:1.0mL·min-1,柱温:30℃,用蒸发光散射检测器检测,载气流速为2.4L·min-1,漂移管温度为80℃的条件下,可测定水苏碱的含量。根据不同产地益母草生物碱类和黄酮类成分的测定分析,建立益母草药材的高效液相指纹图谱。无机元素与重金属元素的分析:采用ICP-MS法简单、快速、有效的测定益母草中15种无机元素的含量,研究结果显示益母草中微量元素中以Ga、Ba、Cu、Zn的含量较为丰富。重金属Hg有少量检出外,其余重金属几乎均未检出且在2015年《中国药典》拟新增中药重金属的限量标准之内,通过主成分分析将Ga、Ba、Cu、Zn、Tl、Ni、Sn、As作为益母草中特征元素与质量评价的重要因子。干燥方式对益母草有效成分与无机元素的影响:探讨5种不同的干燥技术(包括传统的阴干、晒干与现代的热风干燥、红外干燥、微波干燥)对益母草中生物碱类、黄酮类含量以及无机元素的影响情况。结果显示,鲜益母草中生物碱类成分含量较高,而热风干燥处理后,益母草中的生物碱类和黄酮类成分保留最多;微波干燥对这两类有效成分造成的损失最大。而益母草干燥前后无机元素的含量变化明显,差异显著的元素主要是Mn,Zn,Sn,Ba,其中Mn,Zn的含量在干燥后增加,而Sn,Ba的含量在干燥后显著下降。文章以探讨生物碱类成分的潜在作用靶点和作用机制为目的,采用反向药效团匹配方法,结合生物信息学分析,预测了水苏碱和益母草碱的潜在作用靶点,并构建了生物碱成分-靶点-疾病网络,验证水苏碱和益母草碱是益母草的主要药理成分,并通过多靶点多途径共同发挥药理作用。研究发现,20个基因PCK1、PTpN1、OAT、CYP2C9、GSTP1、FGG、AKR1C3、SRC、CRABP2、HMGCR、GSTA1、PDE4D、GPI、SULT2B1、RASH、CA2、CBS、HSP71、GSTM2、LCN2、CDK2可能是两种生物碱共同的潜在重要作用靶点,Metabolic pathways、Biosynthesis of antibiotics 以及 Drug metabolism-cytochrome P450 等 7 种通路可能是两种生物碱发挥药理作用的重要途径。生物碱类成分的预测结果不仅体现了中药多靶点、多途径的作用特点,还为深入探讨其作用机制提供了理论依据。
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