除组织中高丰度蛋白对蛋白鉴定的影响及心肌梗死尿蛋白质组分析

• 作 者: 邹丽莉
• 机 构: 北京协和医学院
• 出 处: 北京协和医学院中国医学科学院 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
• 发表日期: 2015年期
• 关键词: 甲状腺蛋白质组 垂体蛋白质组 免疫沉淀去除血清高丰度蛋白 液质联用分析 生物标志物 同位素标记相对和绝对定量 尿蛋白质组 血浆蛋白质组 心肌梗死

研究目的分析免疫沉淀去除组织样品中血清高丰度蛋白对组织蛋白质组鉴定的影响。研究方法人的甲状腺和垂体组织样品经去除12种血清高丰度蛋白抗体柱处理后,得到的低丰度蛋白样品和未处理样品分别进行液质联用分析,以及多肽和蛋白质水平的定性和定量分析。研究结果人的甲状腺和垂体样品中血清高丰度蛋白分别被除去了92.11%±12.87%和78%±25%。所鉴定到的多肽和蛋白与未处理样品相比,甲状腺组织鉴定到的非冗余多肽提高了70%、蛋白鉴定数提高了16.5%,垂体鉴定到的非冗余多肽提高了21.9%,蛋白鉴定数无明显变化。研究结论免疫沉淀去除组织中的血清高丰度蛋白法可以显著的提高组织样品的多肽和蛋白鉴定效率,且更适用于血管密集的样品。研究目的：心肌梗死是一种发病率和死亡率很高的疾病,对心肌梗死的治疗花费大量的人力物力。然而由于缺少高灵敏度快速的方法,很难进行心肌梗死的早期诊断。寻找有效可靠的心肌梗死生物标志物是很有必要的。本研究分析了来自ST间期提高的心肌梗死患者(首次发病12小时内和经皮冠状动脉治疗后7天)的尿蛋白质组和血浆蛋白质组,来寻找心肌梗死潜在的生物标志物。研究方法及结果：通过同位素标记相对和绝对定量方法(iTRAQ)和2D-LC-MS/MS分析方法,1684个尿蛋白和468个血浆蛋白被定量。将175个尿的差异蛋白和47个血浆差异蛋白合并,一共得到216个心肌梗死差异蛋白。根据功能分析,这些蛋白主要参加了凝血系统,线粒体功能障碍和动脉粥样硬化信号通路。应用蛋白印记方法(Western blot)验证了纤维蛋白酶原gamma链(FGG),细胞色素C (CYCS)和载脂蛋白A1 (APOA1)的改变。通过二元逻辑回归分析,尿的FGG和CYCS联合用于心肌梗死的诊断可以达到76.9%的灵敏度和100%特异性,受试者工作特征曲线的曲线下面积达到0.893。研究结论：通过对比尿和血浆中差异蛋白功能,发现尿和血浆可以从不同方面反映心肌梗死的病理学改变。因此将尿蛋白质组和血浆蛋白质组的生物标志物结合,可能会为心肌梗死的诊断提供更多的信息。