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本论文以C.glabrata ATCC 55为研究对象,利用分子生物学和细胞生物学的相关手段,通过检测AMP代谢基因CgAMD1、CgADE12、CgADE13缺失前后的胞内ATP水平、丙酮酸生产性能、TCA循环的代谢效率以及乙酸胁迫下的胞内微环境变化,解析了AMP代谢对菌株生理性能的影响。主要研究结果如下:(1)以C.glabrata ATCC 55为出发菌株构建了Cgamd1Δ、Cgade12Δ、Cgade13Δ和Cgade12ade13Δ。分析其胞内ATP水平变化,发现在YNB培养基中,Cgamd1Δ的胞内ATP水平比ATCC 55提高了15.38%,而Cgade12Δ、Cgade13Δ、Cgade12ade13Δ的胞内ATP水平则分别降低了7.69%、2.56%、5.12%。相同的变化趋势也出现在发酵过程中。20%溶氧水平下,Cgamd1Δ在发酵前期的胞内ATP水平提高了27.28%,而Cgade12Δ、Cgade13Δ、Cgade12ade13Δ的胞内ATP水平则分别下降了14.54%、5.74%和10.47%。(2)发酵过程中,与ATCC 55相比,Cgamd1Δ、Cgade12Δ、Cgade13Δ、Cgade12ade13Δ的代谢速率均下降,其中丙酮酸生产强度分别下降了37.50%、15.00%、75.00%、77.50%,葡萄糖消耗速率也分别下降了20.37%、15.43%、34.57%、37.04%。进一步的分析发现,Cgamd1Δ的丙酮酸生产能力提高了31.40%,而干重对葡萄糖的得率则下降了35.71%,表明碳流更倾向于丙酮酸积累。分析其原因,发现TCA循环中关键酶的活性及中间代谢产物浓度的下降,降低了TCA循环的代谢效率,使得胞内丙酮酸水平提高了103.64%。然而,Cgade13Δ和Cgade12ade13的细胞干重对葡萄糖的得率分别提高了21.42%和18.57%,丙酮酸生产能力却下降了67.44%和71.51%,表明碳流则更倾向于细胞生长。分析其原因,发现TCA循环中关键酶的活力和中间代谢物的浓度的提高,增强了TCA循环的效率。(3)比较菌株在丙酮酸、苹果酸和乙酸胁迫下的生长性能,发现0.2%乙酸胁迫下,菌株间的有机酸耐受性差异最为显著,Cgamd1Δ的菌体浓度比ATCC 55降低了55.91%,而Cgade12Δ、Cgade13Δ、Cgade12ade13的菌体浓度则分别上升了31.56%、16.44%和12.71%。分析乙酸胁迫下的胞内微环境,结果显示:CgAMD1的缺失破坏了胞内微环境,与ATCC 55相比,Cgamd1dΔ的胞内pH、H+-ATPase、细胞膜完整度分别降低了7.34%、5.61%、30.63%,ROS水平、细胞膜电势则分别上升了53.93%、148.03%;CgADE12、CgADE13的缺失则改善了胞内微环境。与ATCC 55相比,Cgade12Δ、Cgade13Δ、Cgade12ade13Δ的胞内pH、细胞膜完整度和细胞膜电势均有不同程度的提高,胞内ROS水平则分别下降了59.67%、16.98%和19.51%。