【摘 要】
：
大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)是我国特有的珍稀濒危野生动物。长期以来,栖息地片段化和种群数量下降,致使其野外仅分布于秦岭、岷山、邛崃、大相岭、小相岭和凉山等6个相
论文部分内容阅读
大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)是我国特有的珍稀濒危野生动物。长期以来,栖息地片段化和种群数量下降,致使其野外仅分布于秦岭、岷山、邛崃、大相岭、小相岭和凉山等6个相互隔离的山系,并分化为两个独立的亚种——秦岭亚种和指名亚种。
为抢救性的保护大熊猫这一珍稀濒危物种,我国政府于2003年启动了大熊猫的离体保护工程。该工程的主要内容之一,就是通过建立大熊猫的基因组DNA文库,达到保护其遗传资源,并为相关的基础科学研究提供基因材料平台的目的。
本论文以细菌人工染色体(BAC)为载体,建立了高容量的大熊猫基因组DNA文库。进一步地,通过对大熊猫II类主要组织相容性复合体(MHC)基因组物理图谱的构建,既验证了该文库的有效性,又对文库进行了基础研究的应用,达到了立题目的。其主要研究结果如下：
1.以新鲜外周血为材料,利用pCC1BAC载体,成功构建了大熊猫的基因组细菌人工染色体(BAC)文库。文库包含的205,800个BAC克隆,保存于2,100块96孔培养板上。经对随机挑取的174个BAC克隆进行脉冲电泳检测,计算出文库的平均插入片段为97kb,覆盖大熊猫基因组约6.8倍(除去5.74％的空载体)。同时,从文库中获得任一单拷贝或多拷贝大熊猫基因的概率为99.93％。
2.16对PCR引物平均每对能够在文库中成功扩增到6.4个阳性克隆,表明了所建文库具有较高的覆盖率。
3.运用4D-PCR文库筛选技术,建立了大熊猫基因组BAC文库的高效PCR筛选文库。该文库包括43个超级库和1462(43×34)个1D、2D、3D、4D超级亚库。任一引物或探针只需77个PCR反应,即可从BAC文库中筛选到所需的阳性BAC克隆。
4.以大熊猫皮肤成纤维细胞为材料,运用染色体荧光原位杂交(FISH)技术,成功地将大熊猫的MHC II类基因组定位于第9号染色体的长臂上。
5.通过GenBank数据库中的同源序列,设计了10对大熊猫MHC II类基因的特异性引物,并成功扩增到了大熊猫Ⅱ类MHC的BTL2、DRA、DQA、DRB1、DOB、LMP2、DMA、DMB、COL11A2和DAXX基因(基因序列已提交GenBank数据库)。
6.运用BAC克隆的末端测序方法,并利用上述10对引物,构建了大熊猫MHC Ⅱ类基因组的物理图谱。进一步地,利用限制性酶切指纹图谱法,证明了所构建的物理图谱中的BAC克隆是有效重叠的,其MHC Ⅱ类基因组的长度约为650kb。哺乳
其他文献
耕地是国家或地区农村经济发展及社会稳定的物质基础,耕地的数量安全、质量安全及生态安全,直接影响粮食的生产、供应安全。粮食安全与生态环境逐渐得到国家的高度重视及社会
多糖具有增进免疫、抗肿瘤、抗病毒、抗感染、抗衰老、抗凝血、降血脂、降血糖等功能,已应用于临床的多糖有香菇多糖、裂褶多糖、云芝多糖等.目前栉杆菌Arthrobaeter sp.发酵液中提取多糖的生物活性并没有报道,本文对栉杆菌多糖的理化性质及生物活性进行了研究。实验具体分为以下五部分:一、栉杆菌多糖提取和理化性质的初步研究:以栉杆菌发酵产物为原料,75%酒精沉淀后,用三氯乙酸(TCA)法去蛋白,得到
1,3-丙二醇英文缩写为1,3-PDO。是无色、无味的粘稠液体。可溶于水、醇、醚等多种有机溶剂。主要用于增塑剂、洗涤剂、防腐剂、乳化剂的合成,也用于食品、化妆品和制药等行业。其最主要的用途是合成苯二甲酸丙二醇酯(PTT)。PTT较PET(聚对苯二甲酸乙二酯)、PBT(聚对苯二甲酸丁二酯)具有更优良的性能,兼具PET的高性能和PBT的易加工性,具有广阔的应用前景,是目前合成纤维新品种开发的热点。目前
肠道免疫是果蝇抵抗病原微生物的主要防御机制。为了研究中药提取物对氧化应激诱导的果蝇肠道免疫功能的的影响,通过喂食氧化应激物(paraquat和H2O2)后统计果蝇生存率的方法,从50种中药中筛选出具有缓解氧化应激损伤作用的中药。通过分析果蝇寿命、肠道干细胞和成肠细胞数量等,探索中药对果蝇肠道氧化应激损伤的影响。实验结果表明,在50种中药中,瓜蒌、红花、川芎和菊花具有缓解氧化应激损伤的作用,主要表现
本研究以相同保持系的Q型、T型、Al型不育系及其35个保持系、19个恢复系合计60份普通小麦为材料,用有性杂交、花粉粒碘染、SDS-PAGE、A-PAGE、同工酶分析等技术,从植株育性、谷蛋白亚基、醇溶蛋白亚基、旗叶和幼花序酯酶和过氧化物酶同工酶等方面对Q型、T型、Al型、A*/R*型雄性不育系统进行了比较研究,以便为小麦雄性不育机理和杂交小麦研究奠定基础。所得结果如下:(1)育性研究发现,杂交组
热激蛋白90是一种常见的分子伴侣，也是非应激状态下细胞中含量最丰富的蛋白之一，它广泛存在于细菌和真核生物细胞中，但古细菌细胞中不存在。真核生物细胞质HSP90对细胞各种条件
本试验选用品质性状优良的籼稻品种为试验材料进行氮、钾的盆栽施肥调控处理，探讨氮钾对水稻不同品种籽粒蛋白质形成、淀粉形成、胶稠度、垩白度以及淀粉合成关键酶活性的调控
细胞的氧化还原状态在细胞的各种生命活动中扮演着重要的角色。本文利用一种GFP的突变体:氧化还原敏感性GFP(reduction-oxidation-sensitive GFP,roGFP1),对顺铂(cisplatin)
菊芋（Helianthus tuberosus）作为一种耐盐碱的经济作物，研究其响应盐碱胁迫的生理学反应具有重要意义。本研究以20 mmol·L-1和50 mmol·L-1 Na2CO3胁迫菊芋幼苗，于1、3、5、7d采
从北美萤火虫中分离到的萤光酶是一个分于量为61KDa的单体蛋白开且酶的活性不需要翻译后加工。因其检测方法上的优势而广泛应用于研究植物基因表达和细胞生理活动，如启动子活