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研究目的:目前对于HSP70基因表达的意义有两种看法:其一认为HSP70mRNA的表达和HSP70的诱导对组织和器官的损伤起保护作用;其二认为HSP70mRNA是组织和器官损伤的一种标志。HSP70基因表达对机体究竟是起保护还是损伤作用?本研究采用一次递增负荷至力竭运动,且应用两种(一次,一个月)高温预处理方式,同时检测机体抗氧化能力及运动能力的情况,探讨运动及高温预处理诱导HSP70mRNA表达对机体的意义。
本实验对P2组受试者采取一个月(8次)高温预处理,研究其对HSP70mRNA表达的影响,检测HSP70mRNA表达是否会对高温重复应激出现适应化现象。研究方法:将20名受试者随机分为3组,运动对照组(C组),高温预处理组(P1组),一个月高温预处理组(P2组),C组和P2组受试者相同,每组10人。C组在跑台上采用Bruce方法进行递增负荷运动至力竭。在安静、运动后即刻、运动后1h分别采肘静脉血,测试HSP70mRNA,SOD、MDA,血乳酸等指标。P1组高温预处理1h(桑拿,温度46±1℃,湿度85%-90%,体重下降2%),结束后到室温(温度25±0.5℃,湿度60%-65%)恢复24h,采安静肘静脉血测试。在跑台上采用Bruce方法进行递增负荷运动至力竭,并在运动后即刻、1h分别采肘静脉血测试各项指标。P2组受试者进行时间全长为一个月,每间隔三天一次(共八次)的高温预处理,桑拿方式同P1组,一个月后到室温(温度25±0.5℃,湿度60%-65%)恢复24h,采安静肘静脉血测试。进行递增负荷运动至力竭后,采血测试各项指标。运动方式及采血时间同上。
实验结果:
(1)运动对照组(C组)受试者血液白细胞HSP70mRNA,在力竭运动即刻比安静时极显著升高(p<0.01),HSP70mRNA比安静升高了2.96倍。运动后1h HSP70mRNA较即刻显著下降(p<0.05),与安静值相比无显著性差异(P>0.05)。高温预处理组(P1组)HSP70mRNA在运动即刻较安静时上升,但差异不显著;运动后1h与即刻相比无显著性差异;P1组HSP70mRNA在安静、运动后即刻及1h均较C组同时间点的值显著升高(p<0.05),且分别升高了10.29倍,2.34倍,10.97倍。一个月高温预处理组(P2组)HSP70mRNA安静时较C组安静值有上升趋势,无显著性差异。P2组HSP70mRNA在运动后即刻、1h均较C组同时间点的值显著升高(p<0.05),且分别升高了0.93倍,3.18倍。P2组HSP70mRNA在安静时、运动后即刻及1h均较P1组同时间点的值显著下降(p<0.05),且分尉下降了0.72,0.43,0.65倍。
(2)C组在力竭运动后即刻,血清SOD活性较安静时升高,无显著性差异(P>0.05)。运动后1h较即刻显著下降(p<0.05)。P1组SOD活性在运动即刻较安静时显著升高(p<0.05),P1组SOD活性在安静时较C组安静升高,无显著性差异(P>0.05)。P1组SOD活性在运动后即刻、1h,均较C组同时间点的值显著升高(p<0.05)。P2组运动后即劾SOD活性较安静时极显著升高(P<0.01),运动后1h SOD活性较即刻极显著下降(P<0.01)。P2组SOD活性在安静时较C组安静升高,无显著性差异(P>0.O5)。P2组SOD活性在运动即刻、1h,均较C组同时间点的值极显著升高(P<0.01)。P2组SOD活性在安静时、运动即刻及1h,与P1组同时间点的值比较均无显著差异(P>0.05)。
(3)C组血清MDA含量在运动即刻较安静时显著增加(p<0.05);运动后1h较即刻显著减少(p<0.05)。P1组MDA含量在运动即刻较安静时显著增加(p<0.05);P1组MDA含量在安静时,运动后即刻、1h时与C组同时间点的值比较,均无显著性差异(P>0.05)。P2组MDA含量在安静时、运动后即刻及1h,较C组同时间点的值均极显著减少(P<0.01)。P2组MDA含量在安静时、运动即刻及1h,与P1组同时间点的值比较均无显著差异(P>0.05)。(4)C组、P1组及P2组在力竭运动时,各主要指标均未出现显著性变化。P2组血乳酸浓度在运动后即刻较C组,P1组极显著增加(p<0.01),但P1组较C组并无显著差异(P>0.05)。P1组、P2组VE较C组均显著增加(p<0.05),其他指标均未出现显著性变化。
结论:
(1)一次递增负荷至力竭运动后,诱导机体HSP70mRNA表达显著升高,同时SOD活性在运动即刻较安静时有上升趋势,MDA含量显著增加,提示抗氧化能力有所升高,却已不能对抗自由基生成的增多,可能发生氧化损伤。HSP70mRNA的表达可能是损伤所诱导,此时HSP70mRNA可作为组织细胞受损伤的标志。
(2)在一次和一个月高温预处理后,安静状态下机体自由基代谢水平均未出现显著变化,虽然两种高温预处理方式均可诱导HSP70mRNA在安静时的高表达,但就本实验所采取的高温方式,在安静时间点是否具有保护作用还有待进一步研究。
(3)对受试者施以两种高温预处理,造成HSP70mRNA的高表达后,同时发现P1、P2组SOD活性在运动即刻、1h均较C组显著升高,P2组MDA含量在运动即刻、1h较C组极显著减少。提示两种高温预处理后,HSP70mRNA在运动即刻、1h的高表达,能够提高机体抗氧化能力,减少自由基的生成,减轻自由基所致损伤。
(4)受试者接受一次力竭运动刺激,可能发生氧化损伤。HSP70mRNA的表达可能是损伤所诱导;而用高温预处理预先诱导产生热休克反应,然后再接受运动刺激表达HSP70mRNA,机体实质得到了保护。
(5)P2组一个月(8次)高温预处理,HSP70mRNA表达量在安静时、运动即刻及1h,均较P1组同时间点的值显著下降,受试者对一个月高温应激的反应程度逐渐降低,HSP70mRNA表达出现适应现象,机体可能出现了对高温应激的适应性反应。