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本文以实验室自合成的大孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂(PGMA/EDMA)为载体,制备了两种新型离子色谱固定相,考察了填料的色谱性能,并将其应用于实际样品的分离分析,取得较好的效果。另外,论文以自合成的大孔单分散亲水性PGMA/EDMA树脂为载体,制备了亲水性弱阳离子交换色谱填料,并放大弱阳离子交换色谱填料和两性离子交换色谱填料,考察填料对标准蛋白的分离性能与放大前比较。将其用于实际生物样品的分离纯化,取得较好的效果。论文主要分以下几部分:
1.以PGMA/EDMA树脂为基质,采用化学键合法,制备了两种新型弱酸型阳离子色谱填料,用于七种无机阳离子以及NH4+和四种有机胺混合样的分离,比较了两种填料的分离性能。选用填料
(Ⅰ)作研究对象,详细考察了淋洗液种类、浓度和流速对六种阳离子分离的影响,并将其用于决明茶和普洱茶中四种无机阳离子的分析。与Dionex IonPac(R)CS12A商品柱比较,分离效果几乎一样,但分析时间缩短44min,各离子加标回收率在92%~107%之间。
2.以PGMA/EDMA树脂为基质,制备了季铵型强阴离子色谱填料。分别对常见六种无机阴离子、四种低碳链酸以及无机阴离子和有机酸混合样进行分离,考察了填料的色谱性能。详细考察了淋洗液种类、pH值、有机溶剂、柱长等色谱条件对阴离子保留行为的影响。应用此固定相对雨水和雪冰融水中阴离子进行分析,与Dionex IonPac(R)AS12A商品柱比较,分离效果几乎一样,测得值基本一致,各离子加标回收率在93%~104%,结果满意。
3.以PGMA/EDMA树脂为基质,采用简单的化学改性方法制备了性能优异的弱阳离子交换色谱填料。详细考察了填料的离子交换特征、标准蛋白的分离性能、表面亲水性能、酸碱稳定性和重现性以及流速对蛋白保留的影响。将填料放大50倍,考察对标准蛋白的分离性能。并用于鲤鱼精巢中鱼精蛋白的分离纯化,经反相高效液相色谱测定纯化后鱼精蛋白的纯度为99.2%,与Shodex IEC SP-825商品强阳离子交换色谱柱比较,纯化结果几乎一样。
4.放大两性离子交换色谱填料,考察放大50倍后该填料对标准蛋白的分离性能,与实验室2年前制各的两性离子交换柱比较。结果表明,放大后的填料同样具有良好的离子交换性能。用该固定相对胰蛋白酶粗样进行分离纯化,通过反相高效液相色谱法和聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳技术测定,纯化后胰蛋白酶纯度达到93%。
5.以PGMA/EDMA树脂为基质,合成了四种强阴离子交换色谱填料,用于标准蛋白的分离,发现其分离效果不如文献报道的好,该填料还需进一步改进。