论文部分内容阅读
目的观察运动干预对大鼠多囊卵巢综合征的影响,研究瘦素(leptin)及其长型受体(OBRb)以及细胞因子信号转导抑制物3(SOCS3)在干预前后的变化,揭示运动预防大鼠PCOS的作用机制,为明确PCOS的发病机制、预防和控制PCOS提供科学依据。方法本实验采取完全随机设计(completely random design),设置对照组、模型组和干预组进行实验,其中干预组采取运动的干预方式,分为高(2h/d)、中(1h/d)、低(0.5h/d)三个运动强度。放射免疫法测大鼠血清性激素、空腹胰岛素、瘦素水平;HE染色观察卵巢组织学变化;实时荧光定量PCR法检测大鼠卵巢组织中leptin、OB-Rb以及SOCS3mRNA水平;蛋白免疫印迹法检测卵巢中OB-Rb及SOCS3蛋白水平;免疫组化法检测OB-Rb、SOCS3蛋白在卵巢中的表达部位和强度。结果大鼠一般情况模型组大鼠PCOS构建成功,表现为肥胖、瘦素抵抗、性激素紊乱、无排卵和卵巢内大量囊状卵泡;空腹胰岛素(FINS)、瘦素(leptin)水平升高。0.5h干预组大鼠体重、血清性激素、瘦素水平均与模型组无统计学差别(P>0.05);动情周期类似,卵巢内含大量囊状卵泡,罕见正常卵泡和黄体;空腹胰岛素水平小幅下降,差异有统计学意义(P<0.05)。1h/d的运动干预减轻了大鼠的体重,使之与对照组无统计学差别(P>0.05),并帮助大鼠恢复排卵功能;卵巢内可见正常卵泡和黄体,伴囊状卵泡;孕酮(P)水平较模型组显著上升但仍低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);卵泡刺激素(FSH)水平显著上升,FINS、leptin水平大幅降低,差异有统计学意义(P<0.05),均与对照组水平无统计学差别(P>0.05)。除雌二醇(E2)浓度低于对照组水平之外,2h干预组大鼠在体重、动情周期、卵巢形态学方面均有良好表现:2h/d的运动降低了PCOS大鼠睾酮(T)、黄体生成素(LH)、FINS、leptin水平,也提升了P和FSH水平,差异均有统计学意义(P<0.05);。卵巢组织中leptin、OB-Rb以及SOCS3基因的转录水平模型组大鼠卵巢leptin和SOCS3 mRNA高于对照水平,OB-Rb mRNA水平低于对照,差异有统计学意义(P<0.05)。0.5h干预组大鼠卵巢中leptin mRNA没有发生变化,与模型组无统计学差别(P>0.05),但OB-Rb mRNA升高,SOCS3 mRNA降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。1h干预组大鼠卵巢中leptin mRNA低于0.5h组水平,差异有统计学意义(P<0.05);OB-Rb mRNA和SOCS3 mRNA均与0.5h组水平无差别(P>0.05)。2h组大鼠卵巢leptin mRNA水平与对照组无统计学差别(P>0.05);OB-Rb mRNA、SOCS3 mRNA水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢组织中OB-Rb、SOCS3基因的翻译水平和表达部位OB-Rb在各阶段发育卵泡的颗粒细胞以及卵母细胞中均有表达。随着卵泡的发育,卵泡的颗粒细胞和卵母细胞中OB-Rb表达呈逐渐增强的趋势。模型组和0.5h干预组各发育卵泡颗粒细胞和卵母细胞中OB-Rb表达量均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。1h和2h的运动干预促进了卵泡和卵母细胞中OB-Rb的表达,显著高于模型组(P<0.05)。三个干预组囊状卵泡颗粒细胞中OB-Rb表达量在组间无统计学差异(P>0.05),均高于模型组水平(P<0.05)。SOCS3与OB-Rb的表达部位一致。在颗粒细胞中,发育卵泡中SOCS3的表达量与OB-Rb呈现相反趋势;而在卵母细胞中则无明显差别。0.5h和1h干预组各发育卵泡中SOCS3的表达量均低于模型组但高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而2h干预组出现异常增高,这很可能与2h运动干预显著促进OB-Rb在卵巢中的表达有关。结论瘦素抵抗是PCOS发病的原因之一;适量的运动通过提高卵巢中OB-Rb的基因表达水平,改善瘦素抵抗,促进卵泡发育,从而达到预防PCOS发病的效果。