兔眼玻璃体切除联合全氟丙烷填充术后早期晶状体上皮细胞凋亡的研究

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第一部分兔眼玻璃体切除联合非膨胀浓度C3F8填充术后早期晶体的病理改变及晶体上皮细胞凋亡的研究目的:通过对兔眼玻璃体切除联合非膨胀浓度C3F8填充术后早期晶体的混浊程度、组织结构的观察及晶体上皮细胞(LEC)凋亡率与Bcl-2、Bax凋亡相关蛋白表达的检测,探讨其与C3F8的相关性。方法:50只健康成年纯系新西兰白兔的100只眼,随机分为三组:A组为正常组6只兔(12只眼);B组为对照组44只眼,行单纯玻璃体切除BSS液填充术;C组为实验组44只眼,行玻璃体切除联合非膨胀浓度C3F8填充术。术后1、3、8、35、45天用Schiotz眼压计测量眼压,用裂隙灯显微镜观察晶体的混浊程度并照相,采用末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测LEC凋亡率,并进行免疫细胞化学染色,定量分析Bcl-2、Bax凋亡相关蛋白的表达。取术后45天兔眼晶体制成电镜标本观察LEC超微结构的改变。结果:1.眼压:1)正常组眼压的平均值为2.06±0.20 Kpa;2)对照组、实验组术后1、3、8、35、45天的眼压值与正常组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。2.晶体混浊情况:1)正常组、对照组和实验组术后晶体的总混浊率分别为0.00%、0.00%、92.36%。实验组术后1、3、8天晶体的混浊度分别与正常组及对照组比较差异均有统计学意义(p<0.05)。2)实验组晶体混浊的发生率及程度,随着C3F8与晶体接触面积的增加和C3F8残留时间的延长而增加,但会随着C3F8的消失而减轻或消失。3.组织病理改变:透射电子显微镜检查可见正常组与对照组术后第45天的LEC均无明显异常;而实验组术后第45天LEC胞浆中出现髓样体,核变形明显,染色质边集,大量聚集的线粒体肿胀、变空,偶见凋亡小体。4.LEC免疫组化检查:4.1 TUNEL检测:1)实验组术后35、45天LEC凋亡率分别与正常组、对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);2)实验组术后35、45天LEC凋亡率分别为7.900±1.514%、15.448±6.250%,二者比较差异有统计学意义(P<0.05);3)实验组LEC凋亡率与术后时间呈显著正相关(r=+0.987,P<0.001)。4.2各组不同时期Bcl-2及Bax凋亡相关蛋白的表达:1)实验组术后35、45天Bcl-2阳性表达显著下调,Bax阴性表达显著上调,分别与正常组、对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);2)实验组术后第35天Bcl-2阳性表达率为12.5%,第45天为0.0%,二者比较差异有统计学意义(P<0.05),术后第35天Bax阳性表达率为37.5%,第45天为75.0%,二者比较差异有统计学意义(P<0.05):3)实验组术后第35天Bcl-2/Bax阳性表达率比值为0.33,术后第45天为0.00,二者比较差异有统计学意义(P<0.05);4)实验组Bcl-2蛋白在LEC中的表达与LEC凋亡率呈显著负相关(r=-0.85,P<0.05),Bax蛋白在LEC中的表达与LEC凋亡率呈显著正相关(r=0.99,P<0.05)。结论:1.C3F8是引起玻璃体切除联合非膨胀浓度C3F8填充术后早期一过性白内障发生的主要原因之一。2.C3F8可引起晶体超微结构不可逆的损害。3.C3F8可导致LEC凋亡,且随术后时间的延长,LEC凋亡率升高。4.玻璃体切除联合C3F8填充术后Bcl-2/Bax凋亡相关蛋白阳性表达率比值的变化可能是引起LEC凋亡的主要原因之一。第二部分兔眼玻璃体切除联合非膨胀浓度C3F8填充术后多次气液交换术对晶体混浊程度及晶体上皮细胞凋亡的影响目的:玻璃体切除联合非膨胀浓度C3F8填充术后未行与多次行C3F8气液交换术,通过对晶体混浊程度的观察及不同时期LEC凋亡率的检测,探讨C3F8气液交换的次数对晶体混浊程度及LEC细胞凋亡率的影响。方法:24只健康成年纯系新西兰白兔的48只眼,随机分为两组:A组为对照组24只眼,行玻璃体切除联合非膨胀浓度C3F8填充术;B组为实验组24只眼,行玻璃体切除联合非膨胀浓度C3F8填充术,并于术后10、20、30、40天用15-20%的C3F8 0.4-0.6ml行气液交换术。术后15、25、35、45天用Schiotz眼压计测量眼压,用裂隙灯显微镜观察晶体的混浊程度并照相,并用TUNEL检测LEC凋亡率。结果:1.眼压:对照组与实验组术后1、3、8、1 3、23、33、43天的眼压值比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.晶体混浊情况:1)对照组与实验组晶体的总混浊率分别是:91.35%、100.00%,比较差异无统计学意义(P>0.05);2)实验组术后15、25、35、45天的晶体混浊程度与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);3)实验组术后15、25、35、45天晶体总混浊率虽无变化,但混浊程度相互比较差异有统计学意义(P<0.05)。3.LEC免疫组化检查:TUNEL检测:1)实验组术后15、25、35、45天LEC凋亡率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05):2)实验组术后15、25、35、45天LEC凋亡率分别为4.448±0.621%、9.098±1.823%、19.687±5.470%、30.732±1.257%,相互比较差异均有统计学意义(P<0.05)。4.实验组LEC凋亡率与晶体混浊度呈正相关(r=+0.910,P<0.001)。结论:玻璃体切除联合非膨胀浓度C3F8填充术后晶体的改变为:1.晶体的混浊程度随着术后气体残留量及维持时间的增加而加重。2.晶体上皮细胞凋亡率随着术后气体残留量及维持时间的增加而升高。3.多次C3F8气液交换术所致的LEC凋亡率升高可能是晶体混浊程度加重的主要原因之一。
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