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本研究的目的是，(1)探讨nm23-H<.1>基因突变对人大细胞肺癌细胞株中经典Wnt信号通路相关基因mRNA表达水平的影响；(2)探讨nm23-H<,1>基因突变对人大细胞肺癌细胞株中经典Wnt信号通路相关蛋白表达水平的影响；(3)nm23-H<,l>基因突变对人大细胞肺癌细胞株中经典wm信号通路中关键激酶GSK-3β活性的影响；(4)nm23-H<,1>基因突变对人大细胞肺癌细胞株体外侵袭力的影响。
材料与方法：在前期研究工作的基础上，本研究以人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980、人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、空载体转染L9981后的L9981-pEGFP细胞株、野生型nm23-H<,l> cDNA基因转染L9981后的L9981-nm23-H<,1>-pEGFP细胞株、第44位点发生Ser→Ala点突变的nm23-H<,l>基因转染L9981后的L9981-nm23-H<,1><44A>-pEGFP细胞株、第96位点发生Pr0→ser点突变的nm23-H<,1>基因转染L9981后的L9981-nm23-H<,1>-pEGFP细胞株、第118位点发生His→Phe点突变的nm23-H<,l>基因转染L9981后的L9981-rim23-H<,1>-pEGFP细胞株，第120位点发生Ser→G1y点突变的nm23-H<,1>基因转染L9981后的L9981-nm23-H<,l>-pEGFP细胞株和第96位点发生ProSer点突变联合第120位点Ser→Gly点突变的nm23-Hl基因转染L9981后的L9981-nm23-H<,I>-pEGFP等9个细胞株作为研究对象，应用RT-PCR和荧光定量PCR检测上述肺癌细胞株中nm23-H<,l>、GSK-3β、β-catenin，Axin和APC基因mRNA表达水平及其差异；应用Western blot检测了上述肺癌细胞株胞浆中m23-H<,1>、β-catenin、磷酸化β-catenin、GSK-3β，Axin和APC蛋白表达水平及其差异，胞核中B-catenin，磷酸化β-catenin和GSK-3β蛋白表达水平及其差异；应用免疫共沉淀同位素闪烁计数检测了上述肺癌细胞株胞浆和胞核中GSK-3β活性及其差异；应用Boyden小室法检测了上述肺癌细胞株体外侵袭能力及其差异。
结果：本研究在国内外首次观察到：
1．上述9个肺癌细胞株中均存在nm23-H<,l>、β-catenin、GSK-3 β，APC和Axin基因mRNA的表达。
2．NL9980细胞株中nm23-H<,l>，β-catenin、GSK-3 β和APC基因mRNA表达水平均显著高于L9981细胞株(P<0.01)，但NL9980和L9981细胞株间Axin基因mRNA表达水平无显著差异(P>0.05)。
3．L9981细胞株中β-catenin和GSK-3β基因mRNA表达水平均显著低于L9981-nm23-H<,1>-pEGFP细胞株(P<0.05)；但L9981细胞株与突变nm23-H<,1>基因转染L9981后的5个转基因细胞株间β-catenin和GSK-3β基因mRNA表达水平比较，均无显著性差异(P>0.05)。L9981细胞株Axin基因mRNA表达水平显著高于L9981-nm23-H<,1>-pEGFP(P<0.05)；但L9981细胞株与转染野生型和其它4个突变rim23-H<,1>基因的转基因细胞株间Axin基因mRNA表达水平比较，无显著性差异(P>0.05)；L9981细胞株与L9981-nm23-H<,1>-pECFP细胞株间APC基因表达水平比较无显著性差异(P>0.05)：L9981细胞株APE基因mRNA表达水平均显著高于转染野生型和突变nm23-H<,l>基因的其它4个转基因细胞株(P<0.05)。
4．L9981-nm23-H<,1>-pEGFP细胞株与L9981转染了突变nm23-H<,1>基因的5个转基因细胞株间nm23-H<,l>基因mRNA表达水平比较，均无显著性差异(P>0.05)。
5.突变nrn23-H<,1>基因转染L9981后的5个转基因细胞株间，以及任何两个突变nm23-H<,1>转染L9981后的转基因细胞株间nm23-H<,1>，β-catenin和GSK-3 β基因mRNA表达水平比较，均无显著性差异(P>0.05)。但APC和Axin基因mRNA表达水平部分细胞株间有显著性差异。
6．NL9980与L9981细胞株问胞浆中nm23-H<,l>蛋白表达水平存在显著性差异(P<0.05)。但野生型nm23-H<,1> cDNA和突变nm23-H<,1>基因转染L9981后的转基因细胞株中均存在nm23-H<,1>蛋白表达，其表达水平比较均无显著性差异(P>0.05)。
7．上述9个细胞株间胞浆中APC蛋白、Axin蛋白表达水平比较，均无显著性差异(P>0.05)。
8．NL9980和L9981细胞株除胞核中β-catenin表达水平无显著性差异(P>O.05)外，NL9980细胞株胞浆中β-catenin和GSK-3 β蛋白表达水平、胞核中磷酸化β-catenin和GSK-3 β蛋白表达水平均显著高于L9981细胞株(P<0.05)；NL9980细胞株胞浆中磷酸化β-catenin蛋白表达显著低于L9981细胞株。
9．L9981-nm23-H<,1>-pEGFP胞浆中β-catenin和GSK-3 β蛋白表达水平均显著高于L9981细胞株(P>0.05)，L9981-nm23-H<,1>-pEGFP细胞株胞浆中磷酸化β-catenin蛋白表达水平则显著低于L9981细胞株(P<0.01)；但L9981-nm23-H<,1>-pEGFP与L9981细胞株胞核中β-catenin比较无显著性差异(P>0.05)；L998 1-nm23-H<,1>-pEGFP胞核中磷酸化β-catenin和GSK-3 β蛋白表达水平均显著高于L9981细胞株(P基因转染L9981后的5个转基因细胞株胞浆中β-catenin蛋白表达水平显著低于L9981-nm23-H<,l>-pEGFP细胞株(P<0.05)；但突变nm23-H<,l>基因转染L9981后的5个转基因细胞株与L9981-nm23-H<,l>-pEGFP细胞株间胞核中β-catenin蛋白表达水平比较则无显著性差异异(P>0.05)。
11．L9981-nm23-H<,l>-pEGFP细胞株与L9981-nm23-H<,l>-pEGFP细胞株间胞浆GSK-3 β蛋白表达水平比较无显著性差异(P>0.05)， 而L9981-nm23-H<,l>-pEGFP细胞株胞核中GSK-3 β蛋白表达水平显著低于L9981-nm23-H<,l>-pEGFP(P转基因细胞株胞浆和胞核中GSK-3β蛋白表达水平均显著低于L9981-nm23-H<,l>-pEGFP细胞株(P<0.01)。
12．NL9980细胞株胞浆和胞核中GSK-3β活性均显著高于L9981和5个突变nm23-H<,l>转基因细胞株(P<0.01)；但NL9980细胞株与L9981-nm23-H<,l>-pEGFP细胞株间胞浆和胞核中GSK-3β活性比较均无显著性差异(P>0.05)。
13.NL9980细胞株体外侵袭力显著低于L9981细胞株(P<0.01)；但NL9980与L9981-nm23-H<,1>-pEGFP和IL9981-nm23-H<,1>-pEGFP细胞株间体外侵袭力比较均无显著差异(P>0.05)；但NL9980细胞株体外侵袭力显著低于其余4个转基因细胞株(P<0.05)。
结论：(1)不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株间nm23-H<,1>，β-catenin和GSK-3β基因mRNA表达水平均有显著性差异；(2)具有不同nm23-H<,1>功能和转移潜能的人大细胞肺癌细胞株间nm23-H<,1>，β-catenin和GSK-3 β蛋白表达水平均有显著性差异；(3)具有不同nm23-H<,1>功能和转移潜能的人大细胞肺癌细胞株间GSK-3β活性均有显著性差异；(4)具有不同nm23-H<,1>功能和转移潜能的人大细胞肺癌细胞株间其体外侵袭力有显著性差异；(5)nm23-H<,1>基因第44位Ser→Ala和第118位His→Pho突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 Wnt信号传导通路相关基因和蛋白表达水平产生明显影响，并明显增加L998l细胞株的体外侵袭能力；但nm23-H<,1>基因第96位Pro→Ser、第120位Ser→Gly，以及第96位联合第120位突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L998l Wnt信号传导通路相关基因表达水平和体外侵袭力仅产生部分影响。(6)nm23-H<,1>基因调控Wnt信号通路基因表达可能是其抑制和／或逆转人高转移大细胞肺癌细胞株L9981侵袭和转移的重要分子机理之一，nm23-H<,1>对L9981侵袭转移的逆转作用有赖于其基因结构和功能正常。