宫颈癌遗传基因变异与放疗敏感性及预后的研究

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宫颈癌在全球女性恶性肿瘤中的发病率排名第四,是女性癌症相关死亡的第二大主要原因。尽管近年来,各国逐渐完善了宫颈癌癌前病变系统性的筛查以及人们进行HPV疫苗的接种,但往往诊断时大多数已是中晚期。同步放化疗是局部晚期宫颈癌的标准治疗方案,部分宫颈癌患者表现出对辐射的抵抗,从而导致不良的预后,因此,如何提高宫颈癌放疗疗效,降低宫颈癌细胞放射抵抗性成为了如今研究的关键切入点。本研究将通过全外显子组测序对宫颈癌放疗敏感及预后相关基因进行分析研究。研究方法:(1)测序分析:筛选并收集2014年至2016年在四川省肿瘤医院进行根治性放化疗的宫颈鳞癌病例信息,经过根治性放化疗后3年内未复发的病例归为未复发组,即放射敏感组,反之,根治性放化疗后3年内局部复发的病例归为复发组,即非放射敏感组。然后通过其年龄,分期以及治疗前肿瘤大小进行一对一匹配。从中挑选匹配后的32例病例进行全外显子测序,根据测序结果对其进行一系列生物信息学分析及与预后相关联的分析,筛选与放射敏感性及预后相关的变异基因。(2)验证分析:根据测序及分析所得的结果利用独立样本对测序的结果进行验证分析。通过免疫组化分析,Sanger测序分析以及荧光定量PCR分析等在基因变异,mRNA表达水平以及蛋白表达水平层面进行验证。研究结果:(1)基因组DNA全外显子组测序结果显示未复发组中5个病例出现TRIM64基因单核苷酸变异,变异类型均为chr11:g.8970174289701743delinsA,突变频率分别是7.93%、14.38%、8.18%、16.15%、16.07%。而复发组病例中并未发现TRIM64基因变异。另外,MMP27、DPCR1、YAP1及BIRC3基因均在复发组发生拷贝数增加,与未复发组有显著差异。RNA测序结果显示在复发组与未复发组之间一共有1072个差异基因,其中有7个LncRNA表达水平与PFS相关,分别为:RP11-335O4.1、CTD-2292M14.1、RP11-94H6.1、RP11-417L19.2、RP4-683M8.2、RP11-20B24.3及LINC00858。(2)免疫组化分析的结果显示TRIM64在宫颈癌组织中表达,且表达在细胞质及细胞间质中。但遗憾的是,Sanger测序并未发现在独立样本中TRIM64基因突变。研究结论:本研究首次发现并证实了TRIM64在宫颈癌中表达,且在复发组及未复发组中有显著的表达差异。提示TRIM64基因突变可能增加了宫颈癌组织的放射敏感性。本研究也在其他研究的基础上进一步证实了LncRNA与宫颈癌预后的关联性,提示从基因水平上对宫颈癌的研究有助于进一步了解宫颈癌放射敏感性及预后相关因素。
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