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目的:本课题从湿浊角度分析肝硬化肠源性内毒素血症病机,探讨香胃联合方组对复合因素诱导肝硬化大鼠血浆内毒素水平的影响,明确香胃联合方组对内毒素导致肝硬化大鼠肝脏保护作用,揭示香胃联合方组防治肝硬化肠源性内毒素血症作用机理,为肝硬化肠源性内毒素血症的防治提供新的思路和方法。方法:将85只Wistar大鼠随机分成正常组10只,香胃联合预防组(简称预防组)10只,乳果糖预防组(简称预对组)10只及纯造模组55只。除正常组外,其余均使用四氯化碳复合因素制造肝硬化模型。按首次0.5ml/l00g、之后0.3ml/l00g剂量皮下注射40%四氯化碳橄榄油溶液,一周二次,同时辅以89.5%玉米面、10%猪油和0.5%胆固醇混和饲料喂养,以10%酒精为唯一饮料。造模期间,预防组给予香砂六君子汤6.875g·kg-1d-1、胃苓汤7.188 g·kg-1d-1隔日交替灌胃;预对组给予乳果糖口服溶液2.083g·kg-1d-1灌胃,日一次;正常组和纯造模组每日一次给予等量生理盐水1ml/100g灌胃。造模持续8周。造模过程中,大鼠死亡19只,其中预防组死亡1只,预对组死亡2只,纯造模组死亡12只,用于判定造模情况处死4只,其中正常组处死2只,纯造模组处死2只。造模成功后,将纯造模组再随机分为5组:模型组9只,香胃联合方组(简称香胃组)8只,香砂六君子汤组(简称香砂组)8只,胃苓汤组(简称胃苓组)8只,乳果糖对照组(简称治对组)8只。预防组、预对组继续给予相应的药灌胃;正常组和模型组继续给予等量生理盐水灌胃;香胃组给予香砂六君子汤6.875g·kg-1d-1、胃苓汤7.188 g·kg-1d-1隔日交替灌胃;香砂组给予香砂六君子汤6.875g·kg-1d-1灌胃,日一次;胃苓组给予胃苓汤7.188 g·kg-1d-1灌胃,日一次;治对组给予乳果糖口服溶液2.083g·kg-1d-1灌胃,日一次;用药共持续4周。实验过程中观察大鼠的一般状况及体重变化情况,用药治疗结束后处死取材。肉眼观察大鼠新鲜肝脏;计算大鼠肝重指数和脾重指数;全自动生化分析仪检测大鼠血清肝功ast(天门冬氨酸氨基转移酶)、alt(丙氨酸氨基转移酶)、alb(白蛋白)、glb(球蛋白)、a/g(白蛋白/球蛋白)指标;鲎试剂显色基质法检测大鼠血浆内毒素水平;elisa法检测大鼠血清no(一氧化氮)、ha(透明质酸)、ln(层粘连蛋白)、pcⅢ(Ⅲ型前胶原)、Ⅳ-c(Ⅳ型胶原)、tnf-α(肿瘤坏死因子-a)、il-6(白细胞介素-6)、ifabp(肠脂肪酸结合蛋白)、d-乳酸水平;elisa法检测大鼠肝组织hyp(羟脯氨酸)及小肠组织s-iga含量;取大鼠肝脏组织作病理切片,进行he染色和masson染色评定肝硬化损伤程度;取回肠组织作病理切片,进行he染色,光学显微镜下观察各组大鼠肠黏膜损伤情况;免疫组化法测大鼠肝组织α-sma(α-平滑肌肌动蛋白)、tlr4(toll样受体4)、nf-κb(核转录因子-κb)表达;real-timepcr法检测大鼠肝脏组织tlr4mrna、myd88mrna、nf-κbmrna表达;real-timepcr法检测大鼠小肠组织occludinmrna表达。结果:1香胃联合方组、香砂六君子汤、胃苓汤和乳果糖均能改善大鼠的一般状况,增加体重,其中香胃组、香砂组、胃苓组之间在体重增加方面无明显差异,而与治对组比较有明显差异(p<0.05);预防组与香胃组比较有显著差异(p<0.01)。2肝重指数和脾重指数:与模型组相比,正常组、预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组差异显著(p<0.01);预防组与预对组之间有明显差异(p<0.05);与预防组相比,香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01);香胃组、胃苓组和香砂组之间无明显差异(p>0.05);香胃组与预对组之间有显著性差异(p<0.01);与治对组相比,香胃组、胃苓组和香砂组差异明显(p<0.05);与正常组相比,预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01)。3肝功、ha、ln、pcⅢ、Ⅳ-c、no、tnf-α、il-6水平及肝组织hyp含量:与模型组相比,正常组、预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组和治对组差异显著(p<0.01);预防组与预对组之间有明显差异(p<0.05);与预防组相比,香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01);香胃组、胃苓组和香砂组之间无明显差异(p>0.05);香胃组与预对组之间有明显差异(p<0.05或p<0.01);与治对组相比,香胃组、胃苓组和香砂组差异明显(p<0.05);与正常组相比,预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01);4内毒素、ifabp及d-乳酸水平:与模型组相比,正常组、预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组差异性明显(p<0.01);预防组与预对组之间有明显差异(p<0.05);与预防组相比,香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01);与香胃组相比,胃苓组和香砂组差异明显(p<0.05);与香胃组相比,预对组和治对组有显著性差异(p<0.01);与治对组相比,胃苓组和香砂组差异明显(p<0.05);胃苓组和香砂组之间无明显差异(p>0.05);与正常组相比,预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01)。5肝组织病理:各组大鼠肝组织胶原纤维面积百分比结果显示:与模型组相比,正常组、预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组差异显著(p<0.01);预防组与预对组之间有明显差异(p<0.05);与预防组相比,香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01);香胃组、胃苓组和香砂组之间无明显差异(p>0.05);香胃组与预对组之间有显著性差异(p<0.01);与治对组相比,香胃组、胃苓组和香砂组差异明显(p<0.05);与正常组相比,预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01)。6小肠组织病理:模型组大鼠小肠黏膜上皮细胞变性、坏死,大量绒毛脱落,固有层裸露,肠黏膜损伤程度重;预防组与预对组大鼠小肠黏膜绒毛顶端上皮下可见囊状间隙,肠黏膜损伤程度轻,两组比较,预防组更轻;香胃组、香砂组与胃苓组大鼠小肠黏膜上皮少数绒毛顶端脱落,固有层明显水肿。香胃组与香砂组、胃苓组比较,肠黏膜损伤程度轻,与预对组比较肠黏膜损伤程度重;治对组小肠黏膜损伤程度介于模型组与治疗组之间。7肝组织α-sma、tlr4、nf-κb免疫组化半定量及tlr4mrna、myd88mrna和nf-κbmrna表达结果:与模型组相比,正常组、预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组差异性显著(p<0.01)。预防组与预对组之间有明显差异(p<0.05);与预防组相比,香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01);香胃组、胃苓组和香砂组之间无明显差异(p>0.05);香胃组与预对组之间有显著性差异(p<0.01);与治对组相比,香胃组、胃苓组和香砂组差异明显(p<0.05或p<0.01);与正常组相比,预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.05或p<0.01)。8小肠组织s-iga含量及occludinmrna表达结果:与模型组相比,正常组、预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组差异明显(p<0.01);预防组与预对组之间有明显差异(p<0.05);与预防组相比,香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01);与香胃组相比,胃苓组和香砂组差异明显(p<0.05);与香胃组相比,预对组和治对组有显著性差异(p<0.05或p<0.01);与治对组相比,胃苓组和香砂组差异明显(p<0.05);胃苓组和香砂组之间无明显差异(p>0.05);与正常组相比,预防组、预对组、香胃组、胃苓组、香砂组及治对组有显著性差异(p<0.01)。结论:香胃联合方组可以有效清除肠道内毒素,改善肠黏膜通透性,明显降低血浆内毒素水平,减轻肝脏损伤,延缓大鼠肝硬化的进展,早期预防用药效果更好。其作用机理可能为:1香胃联合方组通过减少肝硬化大鼠血清d-乳酸、小肠脂肪酸结合蛋白水平,降低肠黏膜通透性,增加紧密连接occludin蛋白表达,提高s-iga的分泌水平,从而降低肝硬化大鼠血浆内毒素水平。2香胃联合方组通过抑制血浆内毒素引起的TLR4-MyD88-NF-κB信号通路,下调TLR4蛋白、MyD88蛋白及NF-κB蛋白表达,减少血中TNF-α、Il-6和NO水平,从而减轻内毒素对肝硬化大鼠肝脏的损害。3香胃联合方组通过改善肝功,减少血浆内毒素及血清肝纤维化标志物水平,降低肝组织Hyp及α-SMA含量,从而延缓大鼠肝硬化的进展。