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背景： 心肌纤维化是高血压、心肌梗死、心力衰竭等多种心血管疾病的共同结果，同时也是多种心血管疾病如心功能不全、心律失常等的病因。研究表明，心肌纤维化是可逆转的病理过程，但是尚缺乏明确的干预措施。脂联素(adiponectin，APN)是具有广泛生物学效应的内源性激素,具有调节糖脂代谢、抗炎、抗动脉粥样硬化等多种生物学保护作用。本课题组前期临床研究发现，血浆脂联素水平与心肌纤维化程度有明确的相关性，并且经动物模型实验证实，脂联素具有抑制心肌纤维化发生发展的作用。本研究在此基础上初步探讨脂联素抑制心肌纤维化的信号转导机制。 目的： 1、分离培养原代乳小鼠心脏成纤维细胞（MCFs）并鉴定。 2、观察APN对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心脏成纤维细胞增殖及纤维化相关信号分子的影响，从而探寻APN抗纤维化的信号转导机制。 方法 1、细胞分离培养及鉴定： 取日龄1-3d的C57乳鼠心室肌组织，采用冷胰酶消化法分离细胞，贴壁差速法获得纯化的小鼠心脏成纤维细胞，形态学及免疫细胞化学（IF）技术进行鉴定。 2、分组及检测： （1）将培养的乳鼠心脏成纤维细胞随机分为五组，分别为对照组、AngⅡ处理组、APN1μg/ml+Ang II组、APN5μg/ml+Ang Ⅱ组、APN25μg/ml+Ang Ⅱ组。各组细胞用无血清培养基饥饿处理24小时，不同浓度APN预处理1h后，加入Ang Ⅱ作用24小时。MTT比色法检测APN对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖的影响；蛋白免疫印迹（Western blot）检测APN对Ang Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞p-ERK/ERK、TGF-β1、NF-κB、GSK-3β/p-GSK-3β、β-catenin等蛋白表达及活化的影响。（2）将心脏成纤维细胞随机分为3组，别为对照组、Ang Ⅱ组、APN组，免疫细胞化学（IF）检测脂联素对NF-κB转位的影响。 3、统计学分析： 计数资料采用均数±标准差(x±s)表示，各组间样本均数的比较采用单因素方差分析，以 P﹤0.05认为有统计学意义。全部数据采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。 结果： 1、小鼠心脏成纤维细胞的原代培养及鉴定 采用冷胰酶联合胶原酶消化法分离培养的小鼠心脏成纤维细胞获得率高，经免疫荧光结合形态学鉴定，细胞纯度接近100％。 2、脂联素对心脏成纤维细胞增殖及MAPK/ERK,TGF-β1,NF-κB，Wnt信号通路影响的测定 2.1 MTT实验结果显示： 与对照组相比，Ang Ⅱ组细胞增殖明显（P＜0.01）；与Ang Ⅱ相比脂联素各浓度组对细胞增殖的抑制明显，差异有统计学意义（P＜0.05），脂联素各浓度组间差异无统计学意义。 2.2 IF结果显示： 荧光标记的p65在Ang Ⅱ组核内浓集最高，脂联素组其次，对照组最弱。说明脂联素可能通过部分抑制Ang Ⅱ的诱导的NF-κB转位，进而抑制心肌纤维化。 2.3 Western结果显示： ①脂联素各浓度组TGF-β1表达量与Ang Ⅱ组相比均显著降低（AngⅡ组 vs对照组P＜0.01，脂联素组vs Ang Ⅱ组P＜0.01），表明脂联素能够逆转Ang Ⅱ诱导的TGF-β1表达的增加。②ERK1/2在对照组、Ang Ⅱ组及脂联素各浓度组表达均无差异（P＞0.05）；Ang Ⅱ组p-ERK、p-ERK/t-ERK与对照组相比均明显升高（P＜0.01）；脂联素25μg/ml组p-ERK、p-ERK/t-ERK与Ang Ⅱ组相比明显降低（P＜0.05），脂联素1μg/ml、5μg/ml组均未见到阳性结果（P＞0.05），说明高剂量的脂联素能够抑制ERK1/2的磷酸化，从而发挥抗纤维化作用。③Ang Ⅱ能够显著抑制CFs GSK-3β的表达并增加其磷酸化状态（P均＜0.01），而脂联素能够显著逆转此效应，表现为脂联素5、25μg/ml组与Ang Ⅱ组相比GSK-3β表达升高（P＜0.01）；p-GSK3β/t-GSK3β脂联素各组与Ang Ⅱ组相比均明显降低（P＜0.01），且各组间差异有统计学意义（P＜0.01），表明脂联素对GSK-3β活性的影响呈现剂量依赖性。对其下游信号分子β-Catenin的检测也得到了一致的结果：脂联素5、25μg/ml能够显著降低β-Catenin在胞浆中的表达(与Ang Ⅱ组相比，P均＜0.01)，且两浓度组间差异具有统计学意义（P＜0.01），即脂联素对β-Catenin的影响也呈现一定的剂量依赖性。 结论： 1、脂联素能够抑制Ang Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞的增殖。 2、脂联素能够部分阻断Ang Ⅱ诱导的NF-κB的转位，进而说明脂联素抑制心肌纤维化可能与对NF-κB活性的调节有关。 3、脂联素可能通过影响 MAPK/ERK、TGF-β1、Wnt/β-Catenin等信号通路活性，从而发挥抗纤维化作用。