论文部分内容阅读
目的:
目前卵巢癌仍是严重威胁广大妇女健康的恶性肿瘤,尽管手术及放化疗对其治疗有效率大大提高,但其5年存活率仍只有30%左右。侵袭和转移是引起卵巢癌患者死亡的主要原因。故深入探究卵巢癌侵袭和转移相关的细胞因子及其作用对进一步阻遏卵巢癌的侵袭和转移具有重要意义。CD82基因又称Kail基因,是四次跨膜超家族(TM4SF)成员之一.研究表明,表达CD82基因的癌细胞其转移能力受抑制,但其原发瘤的生成并不受到影响。CD82基因可能是直接作用于肿瘤转移抑制的基因。本文拟验证CD82对卵巢癌细胞的侵袭和转移具有抑制作用,为防止卵巢癌转移提供新的治疗靶点。
方法:
应用分子生物学技术构建CD82质粒;预实验确定中等转移能力的卵巢癌细胞株(SKOV3)的G418最佳筛选浓度;转染CD82质粒至卵巢癌细胞株(SKOV3),同时转染空质粒至卵巢癌细胞株(SKOV3)及未转染卵巢癌细胞株(SKOV3)做为对照组;G418最佳浓度筛选并建立稳定转染并过度表达CD82mRNA的卵巢癌细胞株(SKOV3-CD82);通过体外细胞粘附实验、划痕修复实验及侵袭实验与转染空质粒的卵巢癌细胞株(SKOV3-vector)及未转染的卵巢癌细胞株(SKOV3)对比,分析CD82对卵巢癌细胞迁移及侵袭等生物学行为的影响。
结果:
1、确定G418对卵巢癌细胞株(SKOV3)的最佳筛选浓度为400μg/ml。
2、RT-PCR法证实转染目的基因CD82的卵巢癌细胞(SKOV3-CD82)中CD82mRNA的表达明显增强。
3、稳定转染目的基因CD82的卵巢癌细胞与转染空质粒组及未转染组比较,粘附能力下降;划痕后12小时及24小时后修复转移能力较差;在transwell小室中的侵袭能力亦较差,均具有明显的统计学意义。
结论:
CD82对卵巢癌细胞的转移与侵袭具有抑制作用。