拟南芥CBP60g蛋白核定位信号的研究

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在真核细胞中,细胞核具有核膜结构,细胞核内与细胞核外物质交换的主要通道是核膜上的核孔复合体。化合物的大小决定其通过核孔复合体的方式,分子量在50kD以上的蛋白质必须通过主动转运才能够进入到细胞核内,这种蛋白质序列上都存在核定位信号。  CBP60s是植物所特有的钙调素结合蛋白家族之一。在拟南芥中,CBP60s家族共有8个成员,即CBP60a-g和 SARD1。已有的研究表明CBP60g是DNA结合蛋白,是病原菌诱导的异分支酸合酶ICS1基因表达和SA积累的关键调节因子。CBP60g蛋白特异定位于细胞核,但CBP60g氨基酸序列中并没有已知的经典核定位信号。  为进一步研究并确定CBP60g核定位信号,本研究用RT-PCR技术从拟南芥中克隆获得CBP60g基因分段后的cDNA片段,再利用In-Fusion技术将各片段cDNA分别与GFP融合,通过原生质体瞬时表达技术观察GFP融合蛋白的亚细胞定位情况。结果显示CBP60g-2-1(第1-84个氨基酸)、CBP60g-2-3(第130-163个氨基酸)、CBP60g-2-4(第163-306个氨基酸)都存在核定位信号,说明CBP60氨基酸序列中含有多个核定位信号。对CBP60g-2-3进一步的研究得到了CBP60g氨基酸序列中第134、156、162位置的精氨酸都是决定核定位信号活性的关键氨基酸。
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