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高盐、干旱和低温等环境胁迫是影响植物生长和作物高产的重要限制因素。水稻是重要的粮食作物,也是单子叶植物研究的模式植物。随着水稻基因组计划的完成,解析基因功能,进而根据其功能在作物遗传改良中加以利用日益成为后基因组学的重要研究内容。锌指蛋白因具有指状结构特征且能结合Zn2+而得名,通过基因工程技术过量表达一些锌指蛋白可以提高植物的耐非生物胁迫能力。本研究运用农杆菌介导的方法将连接到过表达载体反义表达载体及干扰载体的的锌指蛋白基因转入水稻,增加或减少水稻中锌指蛋白的表达量,进而初步研究了转基因水稻的耐逆性变化;为通过基因工程的手段提高水稻的抗逆性提供了一定技术途径和理论基础。
本论文的主要研究结果如下:
1.通过农杆菌介导的植物转化方法将含过表达、反义和RNAi的ZFP36基因表达载体导入粳稻品种日本晴,在含有潮霉素的培养基上筛选获得水稻拟转基因植株。对其中转基因植株的半定量检测分析,证明了转化成功。
2.对具有二叶一心的F1植株在不同逆境胁迫处理下丙二醛(MDA)含量及电解质泄露百分比测定结果显示,反义表达转基因植株及干扰转基因植株的上述指标含量均高于野生型,耐逆性均比野生型差。
3.对具有二叶一心的F1植株用20%PEG6000(模拟干旱)处理后发现,反义表达突变体相对于野生型表现出更严重的萎蔫,耐旱性比野生型差。
上述结果表明ZFPZ36可能在增强水稻耐逆性方面起作用。