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我国马传染性贫血病驴白细胞弱毒疫苗(DLV)是唯一成功应用的慢病毒疫苗,是慢病毒免疫预防很有希望的动物模型。因此,揭开DLV的免疫机制使其可能成为研究HIV等慢病毒疫苗的免疫模型。本研究采用流式细胞术(FCM)、3[H]-TDR掺入法、51Cr释放法等方法对健康马、DLV免疫马、EIA强毒感染马、EIA自然感染马外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群数量、淋巴细胞转化功能及细胞毒性T淋巴细胞杀伤功能等的动态变化进行了观察。在淋巴细胞亚群水平,探索DLV的细胞免疫机理。同时,采用反转录酶活性实验和流式细胞术相结合的方法初步探索了EIAV体外对马外周血淋巴细胞的感染性。 DLV免疫马在免疫期间与免疫前相比,3/4免疫马淋巴细胞总数波动不明显,1/4免疫马淋巴细胞总数显著降低(p<0.05)。所有免疫马CD4+T淋巴细胞数变化不明显。3/4免疫马CD8+T淋巴细胞数升高,其中1匹马显著升高(p<0.05);1/4免疫马CD8+淋巴细胞数降低(p>0.05)。攻毒后,免疫马与强毒感染马(发热期)淋巴细胞总数和CD4+T淋巴细胞数均下降,免疫马比强毒感染马发热期下降少;3/4免疫马CD8+T淋巴细胞数高于免疫前,1/4免疫马比免疫前降低。攻毒期与免疫期相比,所有免疫马淋巴细胞总数和CD4+T淋巴细胞数降低;3/4免疫马CD8+T淋巴细胞数降低,1/4免疫马CD8+T淋巴细胞数升高。强毒感染组1匹马出现3次发热,CD8+T淋巴细胞数在第1次发热期升高,在第2和3次发热期降低;另1匹马出现7次发热,在所检测的4次发热期中,CD8+T淋巴细胞数均降低。结果表明,免疫马在免疫期CD8+T淋巴细胞数升高者,攻毒后完全保护;免疫期内CD8+T淋巴细胞数下降的马,攻毒后不完全保护。 DLV免疫马外周血中EIAV特异性T淋巴细胞增殖水平随着免疫时间延长而逐渐升高。免疫后2个月即能检测到EIAV特异性淋巴细胞增殖反应。在攻毒前检测的结果均高于免疫后2个月检测的结果,在攻毒后1个月所检测到的淋巴细胞增殖反应水平与攻毒前相近;免疫马攻毒后25个月淋巴细胞增殖反应水平高于免疫及免疫攻毒后1个月的马,与EIAV自然感染马检测结果接近;强毒感染马的淋巴细胞增殖反应检测结果低于免疫马。结果提示,淋巴细胞增殖水平的高低与疫苗免疫保护效力呈正相关。 免疫马外周血T淋巴细胞在体外经过EIAV弱毒二次激活后能产生EIAV特异性CTL反应,但EIAV特异性的CTL活性在免疫马之间有一些差异。2/4马攻毒后CTL活性高于免疫期,1/4马攻毒CTL活性不低于免疫期水平,且临床上未出现任何症状:而1/4马攻毒后CTL活性低于免疫期,且临床上出现一过性体温升高症状。其结果可见,CTL活性与疫苗的免疫保护效力相关,证实了DLV诱导产生的EIAV特异性CTL反应在疫苗免疫保护中所起的主导作用。本研究亦证明了DLV体外接种马外周血淋巴细胞72h时,逆转录酶活性最高,且淋巴细胞中仍以CD4+T淋巴细胞为主,为证实将其作为细胞毒性T淋巴细胞的靶细胞提供了依据。 本试验初步证明了DLV免疫马具有CTL活性的细胞为CD8+T淋巴细胞,根据CD8+T淋巴细胞数量和功能上的变化与DLV细胞免疫作用之间的相关性,首次确立了CD8+T淋巴细胞在DLV细胞免疫保护机理中的主导地位。