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阿散酸(Asanilic Acid)是一种有机胂饲料添加剂,它具有抗菌、促生长、改进动物生产品质等多种作用,近年在畜牧业中的应用非常广泛。阿散酸进入动物机体后,大部分在一定时间内排泄出体外,在环境中经迁移转化造成对生态环境的破坏。本文首先建立了检测鸡、猪排泄物以及土壤、植物、水中总砷含量的微波消解-原子荧光法(AFS)和阿散酸含量测定的高效液相色谱法(HPLC)。通过对我国7个省区30多个猪场周围环境中砷污染情况的调查分析,初步评估了当前养殖场周围的砷污染状况;通过对鸡、猪饲喂阿散酸后采集其排泄物测定了总砷和阿散酸原形的含量,初步探讨了阿散酸在鸡、猪体内的消除降解规律。本论文可为全面评估和监控阿散酸在环境中的残留状况及其生态毒理学效应提供依据。本论文分为4部分内容:
I、对鸡、猪排泄物以及土壤、植物、水中总砷含量的微波消解-原子荧光测定法的建立。样品经过采集、预处理、加入不同消解液置于密闭微波消解系统中按设定程序消解,经赶酸和预还原等前处理步骤后在AFS最佳条件下检测。经建立的检测方法简单易行,结果线性良好,相关系数r>0.999;检测限与各添加浓度回收率等均达到测定要求。
II、建立了阿散酸在鸡、猪排泄物中的HPLC检测方法。样品先用40nmol/L的氢氧化钠混合液提取,100g/L硫酸铜溶液沉淀蛋白,加热吹干后进行HPLC分析。色谱条件:色谱柱为9μmAS11-HC250mmx4 mmID柱,紫外检测波长为244nm,流动相为40nmol/L磷酸二氢钾溶液:甲醇(90:10,v/v,pH=2.5),流速1.0mL/min,柱温常温,进样量为10μL。在上述检测条件下能将阿散酸与杂质分开,保留时间约为5.5min:检测限、回收率为:鸡排泄物≥77.64%、猪排泄物≥73.53%,以及批内批间变异系数等均符合检测要求。
III、采用已建立的检测方法对我国7个省区内43个养殖场以及3家生产砷制剂的化工厂周围的环境进行了调查与检测。结果表明,大多数养殖场周围环境中土壤、植被、水体中砷含量超过我国自然界的背景值或国家规定标准的2~3倍(土壤)和2~6倍(水体)。植被与土壤中砷含量存在一定的相关性。与砷制剂生产相关的化工厂砷污染程度大于养殖场。
Ⅳ、在鸡、猪饲喂阿散酸后在其排泄物中的消除规律研究。鸡、猪均连续10天饲喂含200mg/kg阿散酸的全价饲料,自由采食,给药期间及停药后5天内不同时间点收集排泄物,测定阿散酸原形与总砷含量,并将所采集的鸡粪混匀后连续10天进行光照降解实验。结果表明:鸡在混饲12h后排泄物中可检出阿散酸6.82mg/kg,72h时阿散酸含量超过63.42mg/kg,此后至停药时含量较稳定,最高为66.10mg/kg;鸡排泄物中总砷变化趋势与原形相似,饲喂后前60h变化较明显,此后在42~45mg/kg之间变动,最高值为45.89mg/kg:停饲后排泄中总砷与阿散酸含量较快速下降,在停药第96h时排泄物中已检测不出阿散酸原形,总砷含量降至5.93mg/kg,仅为最高时的13.09%。在光照降解实验鸡排泄物中阿散酸原形均发生降解而总砷含量变化不明显,光照组的降解程度与速度均较避光组显著,10天后光照组降解率为95.21%,而避光组降解率为75.15%。猪在混饲12h后排泄物中即可检出阿散酸原形含量为5.37mg/kg,饲喂60h时超过46.37mg/kg,此后至停药时阿散酸含量呈现较稳态水平,最高为51.42mg/kg,总砷变化趋势与原形相似,混饲后前60h内含量变化明显,此后均在38~44mg/kg之间变动,最高值为44.33mg/kg:停饲后总砷、阿散酸排泄量呈较快速下降,第96h时排泄物中已未能检出阿散酸,总砷含量降至6.21mg/kg,仅为最高时的14.34%。在光照降解实验中两组的药物原形均发生降解而总砷含量变化不明显,光照组降解程度与速度均较避光组显著,10天后光照组降解率为96.79%,避光组降解率为74.43%。