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尿卟啉原Ⅲ甲基化酶(S-adenosyI-L-methionine：Uroporphyrinogenmethyltransferase，SUMT)是西罗血红素、维生素B12等卟吩烷类化合物分支合成的第一个酶，SUMT过表达可以促进维生素B12的产量，大肠杆菌重组表达SUMT在紫外灯下能观察到红色荧光，红色荧光物质是SUMT催化过程的副产物，所以重组细胞的荧光强弱可以反映SUMT胞内催化活性。作为红色荧光蛋白，可用于胞内下游酶活性的测定。细菌SUMT的编码基因呈现遗传多样性，分别为cobA、cobA+hemD和cysG，枯草杆菌(Bacillussubtilis)中同时有cobA和cobA+hemD这两种基因，枯草杆菌的cobA+hemD基因命名为nasF。目前对枯草杆菌编码SUMT的基因研究尚未报道，本文分别研究了CobA和NasF重组表达细胞的荧光强度差异和胞内催化活性，取得如下结果：
1.克隆了枯草杆菌cobA和nasF基因，氨基酸序列比对结果显示nasF基因中有cobA结构域，也有hemD结构域。
2.构建了CobA和NasF的表达载体，含CobA和NasF的重组细胞在紫外灯下观察到红色荧光。
3.CobA和NasF重组表达细胞破碎上清液紫外可见光谱扫描显示，在354nm处有主要吸收峰，378nm有次级吸收峰；荧光光谱扫描显示，激发峰为357nm，发射峰为620nm。
4.测定了CobA和NasF重组细胞的荧光强度，在特定培养条件下，NasF重组细胞荧光强度高于CobA。
5.分析了不同浓度IPTG对重组细胞荧光强度的影响。结果表明：IPTG浓度为0.5mM时为最佳诱导浓度，低于0.5mM荧光强度较低，而高于0.5mM时荧光强度不再增强，且对细胞有毒害作用。
6.外源添加不同浓度甜菜碱，分析对荧光强度的影响。结果表明：外源添加甜菜碱对细菌的生长和荧光强度无明显促进作用。
7.Ni-NTR一步亲和纯化CobA和NasF，SDS-PAGE显示一条主带，亚基分子量分别为28kD和55kD。
综上所述，枯草杆菌CobA和NasF都有过甲基化酶性质，NasF重组表达细胞的荧光强度高于CobA重组表达细胞，甜菜碱对重组细胞荧光强度无明显促进作用。