论文部分内容阅读
目的：观察脂多糖诱导急性肺损伤小鼠肺组织闭锁蛋白(occludin)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及特布他林对其表达的影响。探讨特布他林对肺损伤的保护作用及其机制。方法：通过腹腔内注射脂多糖(LPS)建立小鼠急性肺损伤模型。健康雄性无热源昆明小鼠35只，5周龄，体重26-32g，随机分为脂多糖模型组15只、特布他林组15只以及正常对照组5只；其中脂多糖模型组、特布他林组分别于2h、4h、8h3个时间点各5只小鼠。正常对照组经腹腔内注射生理盐水1mL，脂多糖模型组和特布他林组经腹腔内注射脂多糖液1mL(含LPS6mg/kg)。特布他林组小鼠出现呼吸急促后，用已按0.25mg/kg的量抽好的特布他林注射液经气管缓慢滴加，以不会加重小鼠呼吸急促为度，约10分钟内加完。脂多糖模型组和正常对照组气管内滴药以无菌生理盐水代替。正常对照组在0h(造模前)及4h检测动脉血气分析后处死小鼠，而脂多糖模型组和特布他林组分别在0h、2h、4h、8h检测动脉血气分析后于2h、4h、8h各处死5只小鼠；称肺湿/干重比；酶联免疫吸附试验法（ELISA）测定肺组织匀浆液中TNF-α的水平；HE染色观察肺组织病理学改变；免疫组化染色法观察occludin的表达，并通过计算机图像分析测出occludin的平均光密度(AOD)值；透射电镜下观察肺组织的超微结构。结果：⑴三组小鼠0h的PaO2比较，差异无统计学意义(P>0.05)，脂多糖模型组2h、4h、8h的PaO2与0h比较明显降低，差异均具有统计学意义(P<0.01)，特布他林组2h、4h、8h的PaO2明显高于脂多糖模型组，差异均具有统计学意义(P<0.01)。⑵与正常对照组比较，脂多糖模型组的肺湿/干重比明显增加(P<0.01)；特布他林组各时间点的肺湿/干重比均低于脂多糖模型组，差异均具有统计学意义(P<0.01)。⑶脂多糖模型组肺组织中TNF-α含量较正常对照组明显升高(P<0.01)，特布他林组各时间点肺组织中TNF-α含量均较脂多糖模型组对应时间点低，差异具有统计学意义(P<0.01)。⑷脂多糖模型组肺泡上皮细胞occludin的表达量明显低于对照组(P<0.01)，特布他林组各时间点肺组织中occludin的表达量均较脂多糖模型组对应时间点高，差异具有统计学意义(P<0.01)。⑸透射电镜下观察对照组可见到完整的肺泡上皮细胞间紧密连接结构，脂多糖模型组各时间点均可见肺泡上皮受损，见不到完整的细胞间紧密连接结构，特布他林组各时间点亦可见肺泡上皮细胞间紧密连接结构受损，但程度较脂多糖模型组轻。结论：⑴脂多糖腹腔注射能成功诱导小鼠急性肺损伤模型；⑵急性肺损伤早期即出现肺泡上皮细胞间紧密连接结构的破坏；⑶急性肺损伤肺泡上皮细胞occludin的表达降低，而特布他林能上调occludin的表达。⑷特布他林对急性肺损伤具有保护作用，其上调occludin的表达可能是促进肺损伤修复的机制之一。