【摘 要】
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目的:本研究拟探讨低温缺血再灌注心律失常（RA）大鼠心肌miRNA表达变化及其靶基因,为低温缺血RA的防治提供新的靶点和方向。方法:健康成年雄性SD大鼠,体重300±20 g,成功制备langendorff离体心脏灌注模型16个,采用随机数字表法分为2组（n=8）:正常对照组（C组）和低温缺血-再灌注组（IR组）。采用全心停灌60 min再灌注30 min的方法制备低温心脏缺血再灌注损伤模型。C组
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目的:本研究拟探讨低温缺血再灌注心律失常（RA）大鼠心肌miRNA表达变化及其靶基因,为低温缺血RA的防治提供新的靶点和方向。方法:健康成年雄性SD大鼠,体重300±20 g,成功制备langendorff离体心脏灌注模型16个,采用随机数字表法分为2组（n=8）:正常对照组（C组）和低温缺血-再灌注组（IR组）。采用全心停灌60 min再灌注30 min的方法制备低温心脏缺血再灌注损伤模型。C组:继续灌注37℃K-H液105 min;IR组:继续灌注37℃K-H液15 min后,注射Thomas液（4℃,20 ml/kg）使心脏停博60 min,心脏周围用4℃K-H液保护,停搏30 min时半量复灌Thomas液（4℃,10ml/kg）,60 min时使用37℃K-H液再灌注30 min。记录再灌注期间心律失常的类型、持续时间和心脏复跳时间,根据心律失常评分系统将IR组大鼠分为高危组（IR-GW）和低危组（IR-DW）。再灌注结束后取左心室心肌组织进行高通量测序。通过高通量测序建立全心低温缺血再灌注心肌和全心低温缺血再灌注心律失常（RA）心肌的miRNAs表达谱,对差异表达的miRNA（DEmiRNAs）进行筛选和验证。利用RNAhybrid和miRanda数据库对DEmiRNAs调节的mRNA行靶基因预测,通过基因本体论（GO）数据库和京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库对靶基因进行富集分析。实时定量聚合酶链反应（RT-q PCR）验证与全心低温缺血RA相关的差异表达的miRNA。结果:高通量测序共筛选出8个显著性差异表达的miRNA,其中novel-miR-1、novel-miR-17、novel-miR-19、novel-miR-30、novel-miR-43和rno-miR-122-5p表达上调,novel-miR-16和rno-miR-429表达下调。通过生物信息分析技术预测和分析了与这些差异表达的miRNA与心脏疾病相关的靶基因有151个。差异表达miRNA的靶基因参与调控与再灌注心律失常相关的生物学过程有11个,KEGG通路有6个,靶基因富集程度最高的通路分别为钾离子跨膜转运和心肌细胞肾上腺素能受体信号通路,且GJA1基因可能是novel-miR-17的靶点,可能参与了低温全心缺血后再灌注心律失常心室肌的电传导。结论:差异表达的微小RNA可能与全心低温缺血再灌注心律失常的发病机制相关,novel-miR-17、rno-miR-429可能是低温缺血RA进一步功能研究的潜在新靶点。
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