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产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin–producing Escherichia coli,STEC)是一种重要的食源性致病菌,可引起暴发性流行感染事件,近年来该菌引起人的感染致病事件日益增加。本课题主要研究武汉市售食品中STEC的流行状况,同时对分离株的毒力基因、志贺毒素滴度、生物膜及耐药性等进行鉴定,以确定这些菌株的生物学特征。从22家菜场和超市采集样品161份,进行PCR检测,有35份样品污染有O157型STEC,20份样品污染非O157型STEC,其中4份样品污染有O45型STEC,1份样品污染有O145型STEC,1份污染有O111型STEC。污染了STEC的55份样品中只检出stx1基因的有1份(1.8%),只检出stx2基因的有41份(74.5%),同时检出stx1和stx2基因的有13份(23.6%)。污染O157型STEC的样品有27份eae基因检测结果呈阳性,污染非O157型STEC的样品没有检测出hly基因。综合分析发现,O157型STEC在猪肉样品中的检出率最高;而非O157型STEC在牛肉样品中的检出率最高;同时在禽类样品中也检测出O157型STEC,但未检测出非O157型STEC;鱼肉和蔬菜样品没有检测出STEC。对27份eae基因检测呈阳性的样品通过免疫磁珠收集、血清学鉴定、菌落PCR复筛进行分离。共分离出5株O157菌株。对其毒力基因检测发现,有4株菌携带eae、hly、ehx A基因。EC5.11仅携带stx2基因,其余3株菌还同时携带stx1基因和stx2基因。分离株EC9.102不携带上述毒力基因。除EC9.102仅携带rfbO157基因外,其余四株菌均携带fli CH7和rfbO157基因,说明这四株菌为O157:H7血清型。在Vero细胞毒性试验中,对5株分离株进行Stx毒素检测,结果菌株EC9.102滤液对Vero细胞生长无明显影响,其余4株O157:H7菌均对Vero细胞有明显的毒性。4株菌的毒素滴度有一定差异,其中EC9.101和EC9.12与临床菌株EC150的毒力相同,菌株的毒素滴度为1×104CD50/m L。采用分型引物对4株O157:H7菌的stx基因亚型进行鉴定。结果发现除EC5.11外,其余3株菌stx基因亚型为stx1a和stx2a。通过对EC5.11的stx2基因全长测序,并进行序列比对发现,其stx2基因为stx2c亚型。q基因鉴定显示,EC5.11为q21型,其余3株菌为q933型。对4株O157:H7分离株采用K-B纸片扩散法进行耐药性检测,结果显示4株菌对头孢噻肟、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、头孢吡肟、新霉素及氨苄青霉素均呈现高敏反应;四环素和多粘菌素B对其中3株菌抑制效果很强,但对另一株菌EC9.12抑制有限,该菌对这两种抗生素呈中介反应。实验中还设计了两种选择性平板对非O157型STEC进行初步分离,发现非O157型STEC与O157型STEC菌落形态区别不大。本次实验从武汉市售食品中分离到4株O157:H7菌,这是首次从武汉市售食品中分离出产志贺毒素的O157型STEC,其中EC5.11是致病性很高的stx2c亚型,说明武汉市O157的毒力状况发生了改变,存在感染和流行O157的潜在风险,应该引起足够的重视。O45是发现最多的非O157型STEC,这与国外报道的有所不同。表明STEC在武汉市的分布状况可能与欧美国家不同,需要对武汉市的非O157型STEC进行更深入的研究,为武汉市STEC的防控提供更系统的数据。