【摘 要】
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必特螺旋霉素是利用基因工程技术定向酰化螺旋霉素碳霉糖基4位羟基而得到的一组以异戊酰螺旋霉素为主要组分的新型大环内酯类抗生素。本文主要研究了缬氨酸、异亮氨酸和亮氨
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必特螺旋霉素是利用基因工程技术定向酰化螺旋霉素碳霉糖基4位羟基而得到的一组以异戊酰螺旋霉素为主要组分的新型大环内酯类抗生素。本文主要研究了缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸三种支链氨基酸对必特螺旋霉素发酵的影响。
研究结果表明，当使用合成培养基时，缬氨酸可以促进效价的增加，但是异戊酰基螺旋霉素组分明显降低；异亮氨酸使效价降低，而且螺旋霉素组分和异戊酰基螺旋霉素组分降低，但提高了丙酰螺旋霉素、乙酰螺旋霉素等非异戊酰化螺旋霉素组分的比例；而亮氨酸使效价降低，但是异戊酰基螺旋霉素组分得到了明显提高。在此基础上进一步考察缬氨酸对必特螺旋霉素发酵过程代谢的影响。在36小时向合成培养基中添加0.5g/L的缬氨酸以后，菌体糖消耗速率加快，丙酮酸羧化酶活性增加，柠檬酸合成酶活性受到抑制，可能使得更多碳流可以通过甲基丙二酰CoA转羧基酶途径(McT途径)将缬氨酸分解生成的丙酰CoA和丁酰CoA转化为内酯环合成所需要的直接三碳前体甲基丙二酰CoA，最终效价比对照高出45.3％。当使用复合培养基时，发酵进行到72h添加浓度为2.5g/L的亮氨酸使总异戊酰基螺旋霉素和异戊酰基螺旋霉素Ⅲ组分分别提高到55.3％和27.6％，但菌体生长和糖消耗受到抑制以及TCA循环也受到抑制，用于必特螺旋霉素内酯环的前体可能因此供应不足，导致效价低于对照。采用复合培养基在15L发酵罐中对亮氨酸添加效果进行了验证，通过工艺改进，必特螺旋霉素组分中总异戊酰基螺旋霉素和异戊酰基螺旋霉素Ⅲ，分别比对照要提高22.5％-57.5％和23.5％-50％。
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