小青龙汤及其拆方对哮喘发作期小鼠血清Th1/Th2影响的实验研究

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目的:通过动物实验观察小青龙汤全方及其各个拆方组对哮喘发作期小鼠血清中白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)含量、两者之间比值的不同影响,及对哮喘发作期小鼠肺组织病理变化的影响,从目前得到广泛认可的小青龙汤可以有效调节哮喘发作期小鼠Th1/Th2平衡的作用机制出发,探寻出小青龙汤中在调节哮喘发作期小鼠Th1/Th2平衡中起到主要作用的拆方组,运用现代哮喘免疫学发病机制重新证明小青龙汤配伍的合理性和严谨性,探索出它的内在客观规律,以便更好地认识和运用小青龙汤。方法:健康、雄性KM小鼠,SPF级,4-5周鼠龄,体重20-25g,共90只。按随机数字表法分为9组:空白对照组(A组)、模型对照组(B组)、小青龙汤全方组(C组)、解表组(D组)、温肺化饮组(E组)、收敛气阴组(F组)、去解表组(G组)、去温肺化饮组(H组)、去收敛气阴组(I组),每组10只。参考汪受传主编《中医儿科临床研究》中方法制作哮喘小鼠模型:在实验开始第1、7、14天B组至I组小鼠腹腔内注射卵蛋白(OVA)和氢氧化铝凝胶混悬液0.2ml致敏(含100ugOVA和2mg氢氧化铝),而A组则给予腹腔注射等量的生理盐水代替。最后一次致敏后第二天将B组至I组小鼠分别先后置于自制塑料激发箱内,给予2%的OVA生理盐水悬液2ml雾化吸入以激发哮喘(每天每组30min,连续7d)。A组小鼠使用生理盐水2ml进行雾化吸入。从卵蛋白雾化吸入第1天起,C-I组小鼠雾化前半小时给予每天一次相应颗粒剂灌胃,按0.2ml/10g给予等容灌胃,连续7d;从干预给药起每2天测一次小鼠体重,以及时调整给药。末次激发后24小时内进行如下操作:摘眼球采血制备血清、留取肺组织病理标本。最后通过测定哮喘小鼠血清中IL-4、IFN-γ的含量及其比值的变化,探讨各个干预组对哮喘发作期小鼠的不同影响,同时作肺组织病理学检查,切片HE染色后观察各组小鼠肺组织炎性细胞浸润及气道病理变化的情况。结果:与空白对照组相比较,模型对照组IFN-γ、IL-4均升高,其中IFN-γ升高不具有统计学意义(p>0.05),IL-4升高具有统计学意义(p<0.05),Th1/Th2比值降低,且不具有统计学意义(p>0.05);与模型对照组相比较,全方组及解表组可升高IFN-γ,且具有统计学意义(p<0.05),全方组及各个拆方组均能降低IL-4水平,其中全方组、解表组及温肺化饮组具有统计学意义(p<0.05),而在Th1/Th2比值方面,全方组及各个拆方组均能使其比值升高,全方组及解表组具有统计学意义(p<0.05);与全方组相比较,在升高IFN-γ水平方面,解表组不具有统计学意义(p>0.05),在降低IL-4水平方面,解表组及温肺化饮组均无统计学意义(p>0.05),其余各组均p<0.05;解表组与温肺化饮组相比较,组间无明显差异(p>0.05)。肺组织病理切片显示:空白对照组肺组织无明显的炎性细胞浸润,肺泡壁结构完整,血管无充血,支气管管腔壁光滑、完整,纤毛排列整齐;模型组肺组织周围有较多的炎性浸润,肺组织充血也比较明显,部分肺泡间隔断裂形成肺气肿,支气管管壁增厚明显,纤毛大量脱落、粘连、倒伏等,并见大量杯状细胞增生;各个中药干预组均可使肺部炎性浸润较模型对照组减轻,其中以全方组减轻最为明显,但各组支气管管壁仍较厚,其余各组肺病理差别不大。结论:1、哮喘发作期小鼠体内血清IL-4及IFN-γ水平在发作期均升高,但是IL-4升高程度远大于IFN-γ,提示Th2细胞因子的优势地位可能是小鼠哮喘发作的免疫学机制。2、升高哮喘发作小鼠血清IFN-γ水平,进而拮抗IL-4分泌水平,从而达到调节Th1/Th2平衡可能是小青龙汤治疗支气管哮喘的作用机制。3、小青龙汤各个拆方组中,解表组可以使IFN-γ水平升高,IL-4水平降低,在调节哮喘小鼠Th1/Th2平衡中占有最为重要的地位,温肺化饮组可以降低IL-4水平,在整体调整Th1/Th2平衡中占有相对重要的作用,收敛气阴组则没有调节Th1/Th2平衡的作用,但也是不可缺少的。4、去解表组、去温肺化饮组、去收敛气阴组与全方组在调节Th1/Th2平衡中具有统计学差异,从反面印证了小青龙汤配伍的合理性,各个药物组之间相互协同,共同凑效,缺一不可。
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