小檗碱对Epstein-barr病毒DNA复制的抑制作用

• 作 者: 孟菁菁
• 机 构: 中南大学
• 出 处: 中南大学
• 发表日期: 2009年期
• 关键词: 小檗碱 Raji细胞 鼻咽癌 中药治疗

背景与目的：
EB病毒（Epstein-barr virus，EBV）的感染与鼻咽癌的发生发展有着密切的关系，EB病毒相关抗体和EBV-DNA的检测已作为鼻咽癌早期诊断、疗效评价的一个指标。小檗碱（Berberine，BBR）或含BBR的中药复方在鼻咽癌防治中起重要作用。本文通过分析BBR处理后Raji细胞中EBV-DNA的变化量，探讨BBR对EBV-DNA复制的抑制作用。
方法：
选取带EB病毒的Raji细胞作为研究材料，运用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法分析BBR对Raji细胞生长的影响，选用BBR的细胞无毒性浓度（non-cytotoxic concentration，NCC）处理Raji细胞，同时测定培养基中LDH的含量，进一步确证BBR的NCC；采用巢式荧光定量PCR方法，在Mx3000p型检测仪上定量检测EBV-DNA的含量，分析BBR对EBV-DNA复制的影响。
结果：
1.MTT结果显示，BBR在10～100μol/l对Raji细胞增殖生长有明显的抑制作用（P<0.05），而在0～10μmol/l对Raji细胞生长增殖无明显影响（P>0.05），因此0～10μmol/l为BBR对Raji的细胞无毒性浓度（NCC）。
2.LDH结果表明，BBR在0～10μmol/l时处理Raji细胞，细胞培养基中LDH含量与空白对照组无明显差异。0～10μmol/l确为BBR细胞无毒性浓度范围（NCC），下部实验采用该浓度进行实验。
3.巢式荧光定量PCR分析EBV-DNA拷贝数结果表明，当BBR的浓度为40μmol/l、10μmol/l、1.25μmol/l时处理Raji细胞，细胞中EBV-DNA拷贝数显著降低（P<0.05）。
结论：
1.MTT结果和LDH检测结果均提示，0～10μmol/l为BBR的对Raji细胞的细胞无毒性浓度。
2.BBR可以抑制Raji细胞中EVB-DNA的复制。
3.BBR在0～10μmol/l范围对Raji细胞生长分裂和细胞生理活动无明显影响，在此浓度下BBR仍可以抑制Raji细胞中EBV-DNA的复制，这可能是BBR确切的药理学作用而非毒性作用。这为使用BBR或者含BBR的中药复方来防治鼻咽癌的提供了新的实验依据。