【摘 要】
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该研究首先根据GenBank上的黑腹果蝇(Drosophlia melanogaster)抗真菌肽Drosomycin和叔白颜果蝇(Drosophilatriauraria)抗真菌肽Drosomycin-likeA/B的氨基酸序列同源比对结果
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该研究首先根据GenBank上的黑腹果蝇(Drosophlia melanogaster)抗真菌肽Drosomycin和叔白颜果蝇(Drosophilatriauraria)抗真菌肽Drosomycin-likeA/B的氨基酸序列同源比对结果,选取同源性比较高的区段设计简并引物,参考密码子使用数据库(http://www.kazusa.or.jp/codon),选用几种昆虫(Tenebrio molitor,D. melanogaster,Holotrichia diomphalia,Sarcophagaperegrina)已公布的球蛋白(globin)基因密码使用频度中比较高的密码子,优化设计了一对简并引物SFP/SRP,使其简并度降低到48/64,两者的退火温度更加接近.在试验中仍然采用了热启动法和单双引物对比PCR扩增法,有效地解决了简并引物扩增谱中单引物扩增带的干扰问题(肖业臣,2003;魏剑波,2003).使用上述SFP/SRP简并引物,在基因组水平上对8种供试拟靶昆虫进行了PCR扩增筛查,从拟澳洲赤眼蜂(成虫)Trichogramma confusum、美洲大蠊Periplaneta americane、中国家蝇Musca domestica vicina和米蛾Corcyra cephalonica得到阳性扩增带.将这些阳性扩增带克隆到pGEM<(R)>-T Vector中,转化E.coli DH5α,在含有X-Gal、IPTG和Amp的LB平板上,利用蓝白斑筛选含有外源插入片段的重组质粒,经PCR鉴定和酶切鉴定后对阳性克隆进行测序.
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