人胚胎生殖细胞移植治疗猪心肌梗死及心肌再生

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目的:1.建立太湖小型猪急性心肌梗死的实验动物模型;2.观察人胚胎生殖细胞(human embryonic germ cells,hEGCs,人EG细胞)在猪急性心肌梗死模型心脏组织中的存活及分化再生状况;3.探讨人胚胎生殖细胞移植心肌组织后碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达及其意义。方法:取5-10周人胚胎生殖腺嵴,采用组织块培养法体外分离培养人EG细胞。取太湖小型猪2只,在气管插管、呼吸机辅助呼吸、心电监护的基础上,开胸结扎冠状动脉左前降支(left anterior descending branch,LAD),建立猪急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)模型。建模成功后随机分为移植组和对照组,移植组将体外培养的人EG细胞直接注射到心肌梗死的边缘区,对照组以同样方法注入等量PBS。术后2周处死小型猪,取出心脏组织。以鼠抗人细胞核抗体MAB1281为示踪剂,用免疫组织化学方法检测移植细胞的分布及存活情况,观察心肌形成转录因子NKx2.5和心肌肌钙蛋白T(cTnT)在移植组猪心脏组织的阳性表达;将人EG细胞与人胚胎心肌细胞共培养来模拟心肌微环境,采用ABC-ELISA法检测细胞培养第3天和第9天上清液中bFGF的表达,并与人EG细胞单独培养相比较,探讨人EG细胞移植心肌组织后bFGF的表达及意义。结果:LAD结扎后心电图及心脏组织学观察证实猪AMI模型制作成功;人EG细胞异种异体移植于猪AMI模型,免疫组织化学检测结果显示,移植组心肌梗死区鼠抗人细胞核抗体MAB1281阳性表达,同时可观察到新生的心肌细胞,这些细胞呈NKx2.5和cTnT阳性表达,对照组阴性表达;人EG细胞与心肌细胞共培养上清液中bFGF的表达量比同一时间人EG细胞单独培养均显著增加(P<0.05)。结论:1.成功地建立太湖小型猪急性心肌梗死的动物模型;2.人EG细胞移植此模型心肌组织中不仅能存活,而且呈现向心肌分化的表型;3.人EG细胞与人胚胎心肌细胞共培养上清液中bFGF的表达量比同一时间人EG细胞单独培养均显著增加,提示人EG细胞移植心肌后bFGF的表达显著增加,具有促进缺血心肌血管新生、改善心功能的作用。本实验结果表明:人EG细胞异种异体移植治疗急性心肌梗死是可行的。
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