马奶酒乳酸菌胞外多糖生物合成条件的研究

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本项研究主要以内蒙古锡林郭勒牧区马奶酒为样品,进行了马奶酒发酵菌的活化、分离、纯化,共分离到乳酸菌41株。对分离到的乳酸菌进行胞外多糖(EPS)高产菌株的筛选,结果筛选出1株高产的乳杆菌,对其进行形态学特征和生理生化特性的研究,确定其为米酒乳杆菌,并进行胞外多糖生物合成能力的研究。本研究分别改变培养基的碳源、氮源、盐类以及发酵温度、时间、pH等条件,探讨其对乳酸菌胞外多糖生物合成条件的影响,确定了米酒乳杆菌BXR-5-3的EPS的最佳生物合成条件为:初始pH6.0,发酵温度35℃,发酵时间26h;优化的培养基MRSB的组成为:蛋白胨1.5%;胰蛋白胨1.0%;葡萄糖1.5%;乳糖1.5%;K2HPO4 0.2%;MnSO4·4H2O 0.02%;MgSO4·7H2O 0.02%;醋酸钠0.5%;酵母粉0.5%;Tween80 1 mL/L。乳酸菌胞外多糖(EPS)分离纯化过程是发酵液经过离心、酒精沉淀、透析、冷冻干燥得到的胞外多糖粗品,依次经DEAE-52纤维素层析和SephadexG-200凝胶层析分离得到两种组分。胞外多糖Ⅰ经纸层析和SephadexG-200等方法检查纯度,表明其为均一组分,用SephadexG-200凝胶柱层析法测得胞外多糖Ⅰ的平均分子量为85100D。乳酸菌EPS抑菌试验结果表明,乳酸菌EPS对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均无明显的抑制作用。脱脂乳培养基中分别加入0.05%和0.10%(w/w)的胞外多糖粗品,对嗜酸乳杆菌和两歧双歧杆菌的生长也无明显的促进作用。
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