论文部分内容阅读
目的：我国是肾综合征出血热病例报道最多的国家，在我国存在多个肾综合征出血热疫区。1955年，在内蒙古牙克石地区发现首例肾综合征出血热病人，随后疫情不断扩大，病例逐渐增多。1984年在牙克石建立疫情监测点，多年监测数据表明牙克石疫区的性质有所转换，我们利用分子生物学方法检测当地啮齿动物携带汉坦病毒情况，为更好地开展肾综合征出血热预防控制工作提供科学依据。 方法：在牙克石地区采用夹夜法捕获啮齿动物，利用形态学鉴定鼠种，现场解剖取其肺组织，迅速置于液氮中。利用间接免疫荧光（IFA）和RT-PCR技术，检测啮齿动物中HV自然感染情况及其基因型别，用MrBayesv3.1.2软件构建系统发生树分析与其他HV基因型之间的关系。同时，提取HV检测为阳性标本的总DNA，扩增Cytb基因。 结果：1）牙克石地区共捕获啮齿动物442只，经间接免疫荧光（IFA）检测，共发现6份黑线姬鼠鼠肺标本为HV抗原可疑阳性。阳性标本提取总RNA，Nested-PCR扩增L片段，所有阳性标本均未扩增到目的片段。 2）莫氏田鼠52只（经IFA检测未见阳性）、鼩鼱6只，采用RT-PCR方法进行检测。52份鼠肺标本提取总RNA，Nested-PCR扩增汉坦病毒L片段，共得到5条片段，均来自莫氏田鼠。核苷酸Blast结果显示为目的片段，设计引物扩增S、M片段。5份标本全部扩增到全S核苷酸序列和部分M核苷酸序列（Gc片段），其中2份扩增到全M序列。S基因片段由1848-1861个核苷酸组成，M基因片段由3662个核苷酸组成。同源性分析发现5株病毒与哈巴罗夫斯克病毒（KHAV）具有最高的同源性，S基因片段为92.5％-96.4%，M基因片段为88.9%-95.4%；但与其他型汉坦病毒的差异较大，S基因片段差异大于21.5%，M基因片段大于25.2%。用全S与全M的核苷酸序列构建系统发生树，这些病毒均与KHAV聚集在一起，构成一个独立的分支。另外，所有已知的KHAV病毒又可以分为两个小的分支，两个病毒分支之间的核苷酸差异大于5.3%。 3）阳性标本提取总DNA，PCR扩增线粒体Cytb基因（Cytochromeb），核苷酸序列比对结果与形态学鉴定结果一致，所有阳性标本均为同一鼠种，同为莫氏田鼠。构建系统进化发生树进行分析，5份阳性标本的Cytb基因与捕自俄国的莫氏田鼠的Cytb基因的进化关系最近。 结论：牙克石地区莫氏田鼠中汉坦病毒的携带率较高（9.62%），所携带的病毒均为KHAV，与俄罗斯远东哈巴罗夫斯克地区扩增到的病毒为同一基因型病毒。该结果支持莫氏田鼠是KHAV的自然宿主。捕获鼠类多为黑线姬鼠，但并未从标本中扩增到HTNV，推测牙克石地区的疫区性质可能已经发生改变，应加强对其他鼠类（如莫氏田鼠）和鼩鼱类动物的监测工作。