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目的：构建人内皮抑素重组质粒(pEGFP-N1-hES)，并用其体外转染人胚胎肾细胞(Human Embryonic Kidney Cell，Hek-293)，探讨转染后Hek-293细胞的人内皮抑素(hES)表达情况；微囊包裹hES/293细胞后的内皮抑素释放情况：微囊化内皮抑素球周注射后的眼内分布及生物相容性;为内皮抑素抗脉络膜新生血管生成的基因治疗奠定基础。
方法：1．利甩pEGFP-N1质粒，构建pEGFP-N1-hES。2．pEGFP-N1-hES体外转染Hek-293细胞，运用荧光显微镜观察转染效率，G418筛选转染细胞。3．免疫组化染色检测转染后Hek-293细胞hES的表达分布，蛋白印迹法(Western blot)检测转染后培养液上清中hES的表达。4．微囊包裹hES/293细胞， Western blot法检测包裹后培养液上清中hES的表达。5．紫外分光光度法、考马斯亮兰法检测ES囊外释放情况；免疫组化、Elisa法、Western-blot法检测SD大鼠球周注射微囊化内皮抑素的眼内分布、浓度和蛋白表达，重要器官(心、肝、脾、肺、肾)、球旁组织行病理学检查。
结果：1．重组pEGFP-N1-Endostatin质粒，经PCR、酶切和测序鉴定，质粒构建正确，成功构建了pEGFP-N1-hES质粒。2．体外转染24h后，倒置荧光显微镜下观察，可见细胞中绿色荧光蛋白(green fluorescent protein GFP)荧光，间接反映目的基因的表达，转染效率约40％。G418筛选后的hES/293细胞可持续分泌人内皮抑素。3．免疫组化可见pEGFP-N1-hE转染后，Hek-293细胞浆内棕黄色的阳性反应，证实转染后Hek-293细胞产生人内皮抑素。对照组中细胞胞浆无染色。4．微囊化hES/293细胞产生的蛋白可以自由扩散出微囊膜外，并呈持续性表达，5．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见ES蛋白条带；外核层，视椎、视杆层，RPE层均见ES蛋白阳性表达；重要器官、组织病理学检查未见异常。
结论：本研究利用pEGFP-N1质粒，可以构建人内皮抑素重组质粒(pEGFP-N1-hES)，并可转染体外培养的Hek-293细胞；转染后的Hek-293细胞内有hES表达，并可分泌至细胞外；微囊化hES/293细胞产生的蛋白可以自由扩散出微囊膜外，并呈持续性表达；微囊移植后重要器官、球旁组织病理学检查未见异常。这些结果表明微囊化hES/293可能成为内皮抑素抗脉络膜新生血管生成基因治疗的合适载体。