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背景:研究已发现在许多人类的原发和继发肿瘤中,HGF依赖的自分泌c-Met(HGF受体)发生激活,包括乳腺癌,胶质母细胞瘤,骨肉瘤,黑素瘤等。非自分泌(旁分泌)的机制也能激活肿瘤细胞的转移性生长潜能。在原癌基因转化过程中,c-Met活性的调节可能与其在正常生理活动的信号通路中不同。c-Met的过度表达是潜在致癌因素,研究显示升高的c-Met水平和c-Met信号通路的功能激活能使正常成骨细胞发生转化。c-Met失调引起肺癌发生的两条重要途径是过度表达和基因突变。非小细胞肺癌和小细胞肺癌中都能发现c-Met过度表达。窄谱c-Met激酶抑制剂SU11274、PHA665752、XL880、XL184对肺癌显示潜在抑制活性,已进入临床试验。SIM-89是我国自主研发的小分子c-Met抑制剂,目前正在进行临床前研究。目的:初步探讨小分子c-Met抑制剂SIM-89的抑制酶谱,研究其对人肺癌细胞(A549、H460、H441、H1299、H1993)及小鼠黑色素瘤B16F10生长、迁移的抑制作用。观察其对裸鼠人肺癌移植瘤生长的影响。了解SIM-89抑制肿瘤细胞生长的相关作用机制,为进一步的体内试验及临床应用提供科学依据。方法:Z-lyte检测技术对SIM-89进行包括c-Met在内70种激酶酶谱筛选。对其中有较强抑制作用的激酶进行MOA分析。Real-time PCR法比较药物处理组和对照组细胞样本之间特定基因的表达差异。蛋白质免疫印迹法比较c-Met和p-Met表达情况的差异。ELISA法检测SIM-89干预后不同时间点以上细胞培养上清液的HGF浓度。CCK8法检测SIM-89作用于A549、H460、H441、H1299、H1993、B16F10细胞后,不同时间点(24h、48h、72h)的细胞活力。Transwell迁移实验观察药物对细胞迁移的抑制。A549、H460细胞裸鼠皮下注射建立人肺癌模型。B16F10裸鼠尾静脉注射建立裸鼠黑色素瘤肺转移模型。分别记录肿瘤生长曲线和裸鼠体重变化,割取肿瘤组织以免疫荧光组化法分析血管生长情况。结果:SIM-89对c-Met(IC50=297n M)、AMPK、TRKA(IC50=150.2n M)3种激酶有显著抑制作用。SIM-89对c-Met激酶为ATP竞争型抑制。Real-time PCR检测发现SIM-89能显著抑制H460细胞的STAT1、JAK1、MET基因的表达。蛋白质免疫印迹法发现SIM-89能抑制A549及B16F10细胞的c-Met表达,能抑制HGF诱导的p Y1349位点的Met磷酸化。SIM-89药物处理后,细胞培养液上清HGF水平明显低于对照组。经SIM-89处理后各细胞株活力受到明显抑制,并且这种抑制作用呈现时间及浓度依赖性,相关系数r分别为0.656、0.448、0.961、0.82、0.804、0.821(P=0.000)。Transwell迁移实验发现在HGF干预下,H460、H1299的迁移明显受到抑制;在FBS干预下,B16F10、H1299的迁移明显受到抑制。体内实验中,SIM-89能抑制裸鼠H460肿瘤生长,但差异无显著性。SIM-89能显著抑制裸鼠B16F10肺转移(P=0.000)。免疫荧光显示SIM-89治疗组皮下肿瘤和肺转移瘤内血管密度下降。结论:SIM-89对c-Met、TRKA激酶有显著抑制作用。SIM-89能显著抑制H460细胞的STAT1、JAK1、MET基因的表达,抑制A549及B16F10细胞的c-Met蛋白表达。在体外可明显抑制肺癌细胞的生长和迁移。SIM-89也能显著抑制肿瘤细胞培养液中HGF的自分泌。SIM-89能抑制裸鼠H460肿瘤生长和裸鼠B16F10肺转移,可能影响肿瘤血管发生。可进行体内实验进一步研究SIM-89的药代动力学和毒性,为临床试验提供依据。