香烟烟雾上调大鼠肺组织和RLE-6TN细胞D4-GDI表达

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【目的】检测D4-GDI在被动吸烟大鼠肺组织以及CSE处理的RLE-6TN细胞的表达水平变化,从而初步探索D4-GDI是否参与了吸烟相关性COPD的发病机制。【方法】1.动物实验部分:取40只雄性SD大鼠,按随机原则分成4组,每组10只,按照本实验室传统方法复制被动吸烟大鼠模型,检测肺功能,收集对照组、被动吸烟2个月组、被动吸烟4个月组、被动吸烟4个月戒烟1个月组(戒烟组)大鼠的肺组织标本,HE染色观察肺组织结构,用免疫组织化学、反转录-PCR(RT-PCR)、Western blot方法检测D4-GDI的表达水平。2.细胞实验部分:用香烟提取物处理RLE-6TN(大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞)0h、3h、6h、12h、24h,用免疫荧光细胞化学、反转录-PCR(RT-PCR)、Western blot方法检测D4-GDI的表达水平。【结果】1.动物实验部分:HE染色示对照组肺组织结构无明显破坏,吸烟2个月组肺泡壁完整性受损,吸烟4个月组肺组织结构破坏最明显,戒烟组肺组织结构破坏稍有好转,但较吸烟4个月组无明显变化。RT-PCR结果显示D4-GDI表达最弱的为对照组(1.21±0.06),接下来是吸烟2个月组(2.09±0.07),吸烟4个月组D4-GDI表达最强(2.45±0.12),戒烟组(1.84±0.05)较吸烟2个月组、吸烟4个月组表达减少但仍强于对照组,各组间两两比较,均有统计学意义,P均<0.05。Western blot趋势同RT-PCR结果,从弱到强分别为(0.30±0.06、0.79±0.15、1.03±0.06、1.46±0.11),各组间两两比较,均有统计学意义,P均<0.05。免疫组织化学染色结果显示D4-GDI广泛表达于除支气管上皮细胞以外的各种肺组织细胞,4组间的表达强度变化趋势为表达最弱的为对照组,其次是吸烟2个月组,吸烟4个月组D4-GDI表达最强,戒烟组较吸烟2个月组、吸烟4个月组表达减少但仍强于对照组,变化趋势同Western blot结果一致。2.细胞实验部分:RT-PCR结果显示10%CSE处理不同时间,随着CSE处理时间的延长,D4-GDI的mRNA表达在0h组、3h组为(0.31±0.01、0.40±0.02),在12h组(0.69±0.05)最高,24h组(0.60±0.03)低于12h组但仍高于6h组(0.52±0.04),不同时间点组之间两两比较,均有统计学意义,P均<0.05,Western blot结果显示10%CSE处理不同时间,随着CSE处理时间的延长,D4-GDI的表达逐渐增高,分别为(0.44±0.06、0.78±0.08、1.11±0.12、1.37±0.07、1.65±0.13),在24h组最高,不同时间点组之间两两比较,均有统计学意义,P均<0.05,免疫荧光细胞化学染色检测结果与Western blot结果一致。【结论】吸烟导致D4-GDI在肺组织和RLE-6TN中表达增高,D4-GDI可能参与了吸烟相关性COPD的发病机制。
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