二烯丙基二硫上调Beclin1介导白血病K562细胞自噬

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目的1.明确二烯丙基二硫能否诱导白血病K562细胞发生自噬;2.探讨Beclin1基因在二烯丙基二硫诱导白血病K562细胞发生自噬中可能的机制。方法1. K562细胞培养体系进行细胞培养。不同浓度DADS(10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L)作用K562细胞12小时后及40mg/L DADS作用K562细胞不同时间(3小时、6小时、12小时、24小时)后MDC染色荧光显微镜观察细胞发生自噬情况;应用透射电镜(TEM)观察40mg/L DADS作用K562细胞12小时后K562细胞超微结构改变;流式细胞仪定量检测不同浓度DADS作用K562细胞12小时后自噬率;2.40mg/L DADS作用K562细胞12小时后,RT-PCR和Western blotting检测Beclin1mRNA及蛋白表达水平。结果1DADS诱导K562细胞发生自噬1)不同浓度DADS(10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L)作用K562细胞12小时及40mg/L DADS作用K562细胞不同时间(3小时、6小时、12小时、24小时)后,MDC染色荧光显微镜观察显示各DADS药物处理组,被MDC染上的细胞数明显增加,每个细胞中呈蓝色点状结构自噬泡的数量也增多,40mg/LDADS药物组最为明显;从给药3小时开始即可见较多的被MDC染上呈蓝色点状结构的自噬泡散布于K562细胞胞质中,给药6小时、12小时、24小时也都有较多自噬泡出现,且给药12小时组最明显,空白对照组、溶媒对照组很少有此现象;40mg/LDADS作用K562细胞12小时后,透射电镜观察到胞质内出现大量自噬体,发生细胞自噬现象;2) MDC染色流式细胞术定量检测K562细胞自噬率,空白对照组、溶媒对照组分别为(0.97±0.19)%、(1.05±0.20)%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);10、20、40、80mg/LDADS组的自噬率分别为(10.11±0.08)%、(21.55±0.34)%、(34.36±2.15)%、(19.20±0.95)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),各药物处理组间除20mg/LDADS组与80mg/LDADS组比较差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。2DADS对K562细胞Beclin1表达的影响RT-PCR及Western blotting结果显示,40mg/LDADS作用K562细胞12小时后,Beclin1mRNA及蛋白表达水平均明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而空白对照组与溶媒对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.二烯丙基二硫可诱导白血病K562细胞发生自噬;2.二烯丙基二硫诱导白血病K562细胞发生自噬可能与上调Beclin1的表达有关。
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