痛风宁胶囊质量标准及其抗痛风药效学研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:a62058803
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本文主要通过薄层色谱法(Thin Layer Chromatography,TLC)、高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)和紫外-可见分光光度法(Ultraviolet-visible Spectrophotometry,VIS)分别对痛风宁胶囊(TFN)进行定性和定量研究,建立TFN的质量标准。通过急性毒性实验,检测TFN的安全性;根据小鼠高尿酸血症模型和大鼠痛风性关节炎模型及痛风性肾病等模型,研究TFN降低血尿酸水平、镇痛和抗炎及修复受损肾脏等作用。通过上述实验,以期为进一步应用TFN提供理论依据。1.TFN质量标准研究采用LC 3000-C18色谱柱,以乙腈0.08 moL·L-1磷酸二氢钾溶液(10:90)为流动相,柱温35℃,检测波长为326 nm,检测TFN中芥子碱硫氰酸盐的含量;应用NaNO 2-A1(NO 33-NaOH比色法检测TFN中总黄酮的含量。参照《中国药典》2015年版对TFN中白芥子、金钱草和车前子等进行TLC检测。结果显示:TCL定性鉴别结果斑点清晰,阴性对照无干扰。芥子碱硫氰酸盐在0.84.0μg范围内线性关系良好,平均回收率为101.4%,RSD=1.98%。2.TFN安全性考察实验采用小鼠灌胃的方法测定TFN的半数致死量(LD50)及最大耐受量(MTD)。结果显示:小鼠灌胃TFN的半数致死量未测出,MTD=48000 mg·kg-1。由实验结果表明TFN在临床常用剂量口服安全可靠。3.TFN对高尿酸血症的影响通过酵母膏合并氧嗪酸诱导小鼠高尿酸血症模型,以小鼠血清中的UA、BUN和Cr的含量,以及小鼠肝脏匀浆液中的ADA和XOD活性为检测指标,HE染色观察其肾脏组织病理学变化。结果显示:TFN高剂量组可以显著降低高尿酸血症小鼠UA、Cr、BUN水平及XOD和ADA活性(P<0.05),在一定程度改善小鼠肾脏肾小球萎缩、肾间质纤维化和肾小管扩张等病理变化。由实验结果表明TFN对高尿酸血症具有较好治疗效果。4.TFN对急性痛风性关节炎的影响(1)对小鼠腹腔注射冰醋酸建立急性痛风性关节炎的实验模型,并以小鼠扭体的潜伏期与扭体次数为观察指标。结果显示:TFN给药组可以延长小鼠扭体反应潜伏期(P<0.05,P<0.01),并且减少扭体次数(P<0.05,P<0.01)。其中TFN高剂量最为显著(P<0.05,P<0.01)。由此可以看出TFN在治疗急性痛风性关节炎时具有良好的镇痛作用。(2)采用穿刺法对大鼠踝关节注射尿酸钠(MSU),建立大鼠急性痛风性关节炎模型。造模后检测不同时间段大鼠踝关节肿胀度,大鼠血液中白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞水平,血清及踝关节组织匀浆中NO水平;血清中UA水平;测定踝关节周围的软组织及关节液IL-1β、TNF-α的含量。结果显示:在08 h内TFN高剂量大鼠踝关节肿胀度显著降低(P<0.01,P<0.05),在第4 h最显著(P<0.01);TFN高剂量给药组大鼠血液中白细胞,淋巴细胞,中性粒细胞及血清中UA含量与模型组比较显著降低(P<0.01,P<0.05),血清中NO水平升高(P<0.05);TFN高剂量组大鼠软组织及关节液NO含量及炎症因子IL-1β、TNF-α水平显著降低(P<0.01,P<0.05)。TFN低、中剂量组对上述检测指标的影响无统计学差异(P>0.05)。由此得出结论:TFN可能通过抑制炎症因子来达到治疗的目的。5.TFN对痛风性肾病的影响采用腺嘌呤合并乙胺丁醇片制备小鼠痛风性肾病模型。实验结束后检测小鼠血清中UA、Cr、MCP-1、TNF-α、XOD及BUN水平,以及小鼠肾脏匀浆液中环氧化酶COX-2活性,HE染色观察其肾脏、脾脏和胸腺病理学变化。结果显示:TFN高剂量给药组血清中UA、Cr、BUN、MCP-1、TNF-α、COX-2和XOD水平明显降低(P<0.01,P<0.05)。由病理图片观察,小鼠肾脏肾小球萎缩、脾脏脾窦充血和胸腺皮质和髓质分界不清等病理变化得到一定程度的改善。
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