利用生物柴油粗甘油生产二羟基丙酮工艺条件研究

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1,3-二羟基丙酮(1,3-Dihydroxyacetone,DHA)是最简单的酮糖,外观是白色粉末状结晶,有甜味,易溶于水、乙醇、丙酮和乙醚等溶剂,是一种重要的精细化工产品,可作为农药合成中间体、精细化工原料和医药前体,用途广泛且使用量大。随着石化能源危机的到来,生物柴油产业的快速发展,其副产品甘油产量迅猛增加,急需寻找新的下游产品,提高产品附加值。DHA是能够利用甘油得到的附加值很高的产品,由于粮食和油料作为原料成本过高,国内大多数生物柴油企业生产原料主要是地沟油,从而导致副产品甘油杂质含量多,利用其生产下游产品困难,且易造成环境污染。本文研究了弗托氏葡糖杆菌利用生物柴油生产DHA可行性,分析了不同离子对生产DHA的影响,发现了Zn2+对弗托氏葡糖杆菌转化生产DHA的抑制作用,建立了一套完整的处理方法,并对培养基进行了优化。结果显示,处理后甘油浓度为100g/L、玉米浆为12.6g/L、KH2PO4为3g/L,分批发酵48h生产DHA产量为77.2g/L,降低底物抑制,分批补料发酵产量提高到87.1g/L;选取棕榈油生物柴油副产品甘油分批补料发酵时,甘油杂质较少转化高效,最终DHA产量达到125.8g/L。研究了固定化细胞生产DHA相关方法,考察了固定化方法,固定化试剂浓度、固定化温度、细胞浓度等因素,确定优化试验条件。同时考察固定化细胞性质,固定化细胞的转化时间曲线,及反复分批转化实验,结果显示,固定化试剂海藻酸钠浓度为3%,菌体浓度5.79%,卡拉胶0.36%,45℃以下混合,注射器滴入4%CaCl2和0.3%KCl2混合溶液中,静止1小时,反复分批转化10次后,酶活回收率为65%。建立了分离提取路线,菌体离心分离后利用活性炭对发酵液进行脱色处理,阴阳离子交换树脂脱盐,醇沉除去发酵液中蛋白质、核酸、多糖等大分子,实验结果显示,脱色最佳条件为:活性炭1%,温度60℃,pH4,脱色30min。选取001×7阳离子交换树脂、D315阴离子交换树脂进行脱盐,乙醇料液比为3:1时蛋白沉淀效果最好。浓缩结晶后初晶以95%乙醇溶解重结晶,37℃真空烘干,精品DHA含量99.2%,熔点82℃。
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