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背景和目的:肝内炎症-免疫调节异常和脂质代谢紊乱在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生发展中占有重要地位。Kupffer细胞是肝脏免疫调控的关键细胞,其特有的极化现象在NAFLD中的影响日益受到重视。已知Kupffer细胞可调控肝内多种实质和非实质细胞,影响它们的分化、代谢、凋亡等。然而,目前我们对不同极化状态的Kupffer细胞对肝实质细胞的确切影响尚缺乏深入的了解。本研究旨在通过建立体外Kupffer细胞/巨噬细胞-肝细胞条件共培养体系,研究脂质诱导的巨噬细胞M1/M2极化对肝细胞炎症和脂质代谢的影响。方法:胶原酶原位灌注分离Kupffer细胞和肝细胞。以不同种类脂肪酸[饱和脂肪酸(SFAs)单不饱和脂肪酸(MUFAs)和多不饱和脂肪酸(PUFAs)]孵育Kupffer细胞/巨噬细胞,或同时以PPARγ激动剂/拮抗剂诱导PPARγ表达改变,Real-time PCR检测M1/M2极化基因的表达,同时收集细胞培养上清制备相应条件培养液(CM)。以不同脂肪酸或条件培养液孵育原代肝细胞,Real-time PCR和Western Blot检测肝细胞炎性小体mRNA和蛋白表达,ELISA检测炎性因子的分泌水平,Caspase-1活性比色法检测测定Caspase-1活性,并检测肝细胞脂质合成和分解代谢mRNA和蛋白表达,油红O染色和TG、T-CHO定量检测测定肝细胞内脂质沉积情况。结果:(1)SFAs-PA和MUFAs-OA诱导Kupffer细胞/巨噬细胞M1型为主的M1/M2混合型极化,而PUFAs-DHA则主要诱导Kupffer细胞/巨噬细胞M2型极化;PPARγ激动剂可使脂质诱导的巨噬细胞发生M1向M2的极化转换;相反,PPARγ拮抗剂则降低各种脂质诱导的巨噬细胞的M2型极化。(2)PA可诱导肝细胞NLRP3炎性小体相关mRNA和蛋白表达增加,也可诱导其活性升高并促进炎症因子分泌。OA可诱导肝细胞部分NLRP3炎性小体相关mRNA和蛋白表达增加及炎症因子IL-1β分泌增加,但对其活性无影响。DHA对其无明显影响。CM-PA进一步促进肝细胞NLRP3炎性小体相关mRNA和蛋白表达,并增强其活性和促进炎症因子分泌,而CM-DHA明显下调肝细胞NLRP3炎性小体相关mRNA和蛋白表达,并使其活性减低和炎症因子分泌减少。(3)PA增加肝细胞脂质合成相关mRNA和蛋白表达,明显促进胞内脂质沉积;OA以对脂质合成和分解相关mRNA和蛋白表达均有上调作用,但以促进合成为主;DHA增加脂质分解相关mRNA和蛋白表达。CM-PA和CM-OA可进一步上调肝细胞脂质合成mRNA和蛋白表达,增加细胞内脂质沉积;而CM-DHA可以进一步上调肝细胞脂质分解mRNA和蛋白表达,减少细胞内脂质沉积。(4)PPARγ激动剂减弱了CM-PA对肝细胞脂质合成mRNA和蛋白的上调作用;PPARγ拮抗剂减弱了CM-DHA对肝细胞脂质分解mRNA和蛋白的上调作用。结论:(1)不同种类脂肪酸对Kupffer细胞/巨噬细胞M1-M2极化产生不同影响。(2)PA可直接诱导肝细胞NLRP3炎性小体表达和活性增强,PA诱导的M1型巨噬细胞可增强对肝细胞NLRP3炎性小体表达和活性,而DHA诱导的M2型巨噬细胞则下调肝细胞NLRP3炎性小体表达和活性。(3)脂质诱导的M1型巨噬细胞可进一步增强肝细胞脂质合成代谢,抑制其脂质分解代谢;而DHA诱导的M2型巨噬细胞可进一步增强肝细胞脂质分解,抑制其脂质合成。(4)PPARγ激动剂使脂质诱导的巨噬细胞极化发生M2型偏倚,抑制肝细胞脂质合成代谢;PPARγ拮抗剂则具有相反效应。