抱茎苦荬菜总黄酮的提取纯化及生物活性研究

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抱茎苦荬菜[Ixeris sonchifolia (Bge.) Hance]为菊科苦荬菜属二年生草本植物,又名苦碟子,以二年生干燥全草入药,有清热解毒、止痛、排脓之功效。现代研究发现其具有增加冠脉流量、改善心肌循环、抑制血小板聚集、增加纤维蛋白溶解酶活性等作用。其主要药效成分为黄酮类化合物,包括木樨草素、芹菜素、木樨草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-0-β-D-葡萄糖苷等。本文研究了抱茎苦荬菜总黄酮的提取、纯化工艺,并测定了不同生长期不同部位抱茎苦荬菜总黄酮的含量变化以及药材粗提物、纯化物的抗氧化活性和抑菌活性,为今后抱茎苦荬菜的综合开发利用提供了一定的参考。得出以下主要结论:1、比较研究了抱茎苦荬菜总黄酮的不同提取方法,并对每种方法的最佳工艺参数进行了优化。其中乙醇回流提取法的最佳工艺参数为:用80%的乙醇在80℃下回流提取2次,每次2h,料液比为1:25;微波辅助提取法的最佳工艺参数为:用65%的乙醇在300W微波功率下提取2次,每次2.5min,料液比为1:25。比较发现微波辅助提取法的提取率略高于回流提取法,且省时高效,为提取抱茎苦荬菜总黄酮的较佳方法。2、大孔树脂对黄酮类物质具有良好的分离纯化作用。经实验筛选确定XAD-16大孔树脂是纯化抱茎苦荬菜总黄酮的最佳树脂,其最佳纯化参数为:上样浓度3.0 mg/mL,样液pH值4.0,最大上样量为14.25mg/g湿树脂,吸附速率为2BV/h,用6BV80%的乙醇以1BV/h的流速进行洗脱,得总黄酮纯度达89.1%,得率为49.78%。3、测定了不同生长期不同部位抱茎苦荬菜中总黄酮的含量变化,其中不同生长期的全草中花蕾期药材的总黄酮含量最高,为19.79%;不同部位的药材中叶部的总黄酮含量最高,其中花蕾期叶部药材的总黄酮含量高达30.45%。实验数据为确定抱茎苦荬菜的最佳采收期及入药部位提供了一定的理论依据。4、比较研究了抱茎苦荬菜粗提物及纯化物的抗氧化活性,并进行了系统评价,发现其具有良好的体外抗氧化能力:其中纯化物对DPPH自由基、超氧阴离子的清除能力及还原能力均强于粗提物,只有对羟自由基的清除效果略逊于粗提物,因此认为经纯化后的提取物具有更好的抗氧化能力。5、比较研究了抱茎苦荬菜粗提物及纯化物的抑菌活性,研究发现其具有一定的抑菌作用:其粗提物、纯化物对金黄色葡萄球菌的最小抑制浓度分别为0.625mg/mL和1.25mg/mL,对大肠杆菌的最小抑制浓度分别为1.25mg/mL和5.0mg/mL,粗提物的抑菌效果要强于纯化物,对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌的抑制效果明显强于对革兰氏阴性菌大肠杆菌的抑制效果。本文的主要创新点是确定了微波辅助提取法提取抱茎苦荬菜总黄酮的最佳工艺参数,优选了纯化抱茎苦荬菜总黄酮的树脂并确定了最佳的纯化工艺参数。并首次对比了抱茎苦荬菜粗提物和纯化物的体外抗氧化能力和抑菌能力,丰富了药材生物活性方面的研究内容。
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