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γ-干扰素（IFN-γ）主要是由活化的Th1细胞、CD8+T细胞和NK细胞产生,除具有抗病毒、抗肿瘤活性外,免疫调节作用是其主要的生物学功能,如:激活巨噬细胞、上调MHC Ⅰ、Ⅱ类分子表达水平、促进抗原提呈,诱导Th细胞的分化等,在机体针对肿瘤及多种胞内病原体感染等疾病的细胞免疫中发挥重要的作用,是体现机体免疫功能的一项重要指标。而抗IFN-γ特异性单克隆抗体（McAb）在评价机体细胞免疫功能方面具有重要的应用价值。本研究构建了重组鸡IFN-γ（ChIFN-γ）原核表达载体,并在相应的宿主菌中得到成功表达,制备出能稳定分泌抗ChIFN-γ的特异性McAb细胞株。这为以鸡为动物模型,建立基于抗ChIFN-γ特异性McAb的免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究平台提供了条件。 一.鸡γ-干扰素基因cDNA的克隆与表达 应用RT-PCR技术,根据GenBank中发表的ChIFN-γ mRNA序列,设计出两对引物,分别扩增PreChIFN-γ cDNA片段（含信号肽序列）、成熟ChIFN-γ cDNA片段（不含信号肽序列）。凝胶电泳结果显示,扩增出513bp左右和450bp左右的目的条带,与预期结果相符。将RT-PCR产物纯化、回收后,定向克隆入原核表达载体pGEX 6p-1的EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ位点之间,并转化E.coli BL21。限制性内切酶酶切分析及序列测定证实,所克隆的PreChIFN-γ基因正确,与已发表的序列高度同源,重组质粒命名为pGEX 6p-1-PreChIFN-γ,重组菌命名为BL21（pGEX 6p-1-PreChIFN-γ）。 采用PCR技术从重组质粒pGEX 6p-1-PreChIFN-γ中扩增成熟ChIFN-γ cDNA片段,凝胶电泳结果显示,扩增出450bp左右的目的条带,与预期结果相符。将PCR产物经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切、纯化、回收后,分别插入原核表达载体pGEX6p-1、pET-30a（+）相应位点,经酶切鉴定正确,重组表达载体命名为pGEX