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研究目的： 卵巢癌是女性生殖系统肿瘤中致死率最高的肿瘤，晚期卵巢癌患者5年生存率仅有约30%[1]。卵巢癌治疗以手术及紫杉醇和铂类为基础的化疗药为主，但卵巢癌患者常出现对顺铂或者以顺铂为基础的联合化疗药耐药，这是导致晚期患者5年生存率低的一个重要原因。ARID1A基因编码的ARID1A蛋白是SWI/SNF染色质重塑复合物的一个亚基，最近研究认为ARID1A基因也是一个抑癌基因并在多种肿瘤中发生突变，与顺铂耐药相关但在不同肿瘤中的作用不同[2-4]。因此，探索ARID1A基因在卵巢癌顺铂耐药中的作用及ARID1A基因受哪些因素的调控具有重要的临床意义。本文研究miRNA-9是否调控上皮性卵巢癌ARID1A基因表达以及miRNA-9/ARID1A轴在上皮性卵巢癌耐顺铂中的作用。 研究方法： 1.使用结晶紫染色实验验证A2780FC及C30、A2780sigma及A2780cis两对上皮性卵巢癌细胞的顺铂耐药性；2.western blot检测上述两对细胞株检测BRCA1以及ARID1A的蛋白表达情况；3.使用TargetScan(www.targetscan.org)软件预测调节ARID1A的miRNAs；制作microarray并检测耐顺铂的上皮性卵巢癌细胞中miRNAs的表达情况，以及使用Real-time PCR验证两对上皮性卵巢癌细胞（A2780FC敏感株及C30耐药株、A2780sigma敏感株及A2780cis耐药株）中的miR-9的表达情况；4.在A2780FC以及A2780sigma中构建高表达miR-9的稳定细胞株，western blot检测构建的细胞株ARID1A蛋白的表达情况，4结晶紫染色实验检测经顺铂梯度浓度处理后细胞的耐药变化；5.体外瞬时转染实验：使用lipofectamine3000试剂瞬时转染C30及A2780cis，降低2株细胞的miR-9表达，Real-time PCR验证miR-9的降低水平，western blot检测ARID1A蛋白的表达情况，结晶紫染色实验检测经顺铂梯度浓度处理后细胞的耐药变化；6.western blot检测瞬时转染miR-9-antisense后的Cleaved-capase3蛋白表达情况。 研究结果： 1.miR-9在耐顺铂细胞株（C30和A2780cis）中高表达（***P＜0.01）;2.两对细胞株中BRCA1蛋白表达无明显差异，对顺铂敏感的细胞株（A2780FC及A2780sigma）的ARID1A蛋白表达水平明显高于对顺铂耐受的细胞株（C30和A2780cis）；3.在对顺铂敏感的细胞株（A2780FC及A2780sigma）中过表达miR-9，ARID1A蛋白的表达下降不明显，细胞的耐药无明显变化；4.瞬时转染mir-9-antisense后，C30和A2780cis的ARID1A蛋白表达下调，与对照组相比IC50无明显变化，但细胞数绝对值减少，Cleaved-capase3蛋白表达升高。 研究结论: 1.miR-9在耐顺铂细胞株（C30和A2780cis）中高表达（***P＜0.01），耐顺铂细胞株的ARID1A蛋白表达水平低于顺铂敏感的细胞株（A2780FC及A2780sigma），瞬时转染miR-9-antisense后，C30和A2780cis的ARID1A蛋白表达下调，提示miR-9可能通过调节ARID1A蛋白的表达，参与上皮性卵巢癌顺铂耐药的发生； 2.瞬时转染miR-9-antisense后，C30和A2780cis与对照组相比，IC50无明显变化，但细胞数绝对值减少，Cleaved-capase3蛋白表达升高，提示miR-9在耐药株中可能通过抑制细胞凋亡从而导致顺铂耐药的发生。