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本研究在猪的IGF2R和IPL基因的外显子内寻找多态(SNP或微卫星标记),以SNP或微卫星标为遗传标记研究IGF2R和IPL的印记表达特征,为进一步研究印记基因与家畜生长发育和生产的关系打下基础,并也将丰富表观遗传理论的内容。
l、参考猪的IGF2R(insulin-likegrowthfactor2receptor)的外显子序列,设计并合成引物,进行PCR扩增,以SSCP(singlestrandconformationalpolymorphism)的方法在猪的IGF2R的外显子48(3UTR)第384个碱基处(5→3’),发现一个SNP(G→A),并发现这SNP是NSPI酶切位点。
2、选取猪的IGF2R的外显子48的SNP为杂合子的仔猪3头(约15天龄),以其主要的组织器官mRNA的产物经RT-PCR-RFLP电泳,发现IGF2R的外显子48在以上3头仔猪的心脏、肝脏、脑、肺脏、肾脏、胰脏、胸腺、舌、肌肉、膀胱、脾脏、胎盘等组织器官中仅表达母亲来源的等位基因,证明IGF2R基因在猪上呈母方表达、父方印记的遗传特性。
3、参考人类与小鼠IPL(imprintedinplacentalandliver)的基因序列,通过设计同源性引物扩增并验证猪IPL基因序列,确定所得片段214bp序列为猪IPL基因外显子1部分序列。
4、参考猪的IPL的外显子序列,设计并合成引物,进行PCR扩增,以SSCP的方法在猪的IPL的外显子1部分序列中的第178个碱基处(5’→3’),发现一个SNP(T→C),并发现这SNP是TSPRI酶切位点。
5、选取猪的IPL的外显子l部分序列的SNP为杂合子的仔猪3头(约15天龄),以其主要的组织器官mRNA的产物经RT-PCR-RFLP电泳,发现IPL的外显子1部分序列上在以上3头仔猪的心脏、肝脏、脑、肺脏、肾脏、胰脏、胸腺、舌、肌肉、膀胱、脾脏、胎盘等组织器官中仅表达母亲来源的等位基因,证明IPL基因在猪上呈母方表达、父方印记的遗传特性。