揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡基因表达影响的实验研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hudongfei
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目的:通过手术方法建立新西兰兔右膝关节骨内高压型骨性关节炎,分组进行手法治疗或玻璃酸钠关节内注射等干预模型,造模后8周末处死所有动物,取右膝关节内侧胫骨平台软骨组织,采用HE染色光镜下检测软骨组织的变化,原位末端标记法检测膝关节软骨细胞的凋亡率,采用免疫组化法检测软骨细胞增殖率,检测数据通过统计学处理以探讨:(1)揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡的影响。(2)揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡相关基因表达的影响,及手法治疗的可能作用机制。(3)揉髌手法治疗缓解兔膝关节软骨组织退行性改变的作用机理,发掘中医―治未病的价值和优势。  方法:随机将50只新西兰兔分为手法组、药物组、模型组、假模组和正常组,每组10只;前3组手术结扎相关的血管造成骨内高压型骨性关节炎动物模型,假模组手术但不损伤相应血管,正常组不做任何处理。手法组每只兔揉髌手法治疗17次,药物组膝关节内注射玻璃酸钠注射液5次,其他兔无特殊处理。造模后8周末处理所有动物,取右膝内侧胫骨平台软骨组织,采用HE染色光镜下检测软骨组织的变化,原位末端标记法检测软骨细胞凋亡率,免疫组化法检测软骨细胞凋亡基因Bcl-2、Bax、Fas表达率,数据经统计学处理。  结果:软骨组织病理学变化,肉眼观察可见:假模组和正常组:关节软骨表面光滑完整,呈乳白色或淡蓝色,半透明状;模型组:关节软骨面可见虫蚀样斑点,表面粗糙,不光洁,软骨透明度降低;手法组和药物组:关节软骨面光滑,呈乳白色、色泽黯淡。HE组织染色后观察到手法组:软骨表面光滑平整,四层结构基本清晰。软骨层增厚,表、中层细胞增多,排列稍紊乱,并出现簇状增生细胞团。潮线完整清晰。药物组:大部分软骨表面光滑平整,局部可见小裂隙,四层结构基本清晰。软骨层增厚,表、中层细胞增多,排列稍紊乱,并出现簇状增生细胞团。潮线尚存,但部分稍模糊或出现双潮线。模型组:软骨表面局部凹凸不平,缺损及裂隙易见,四层正常结构消失。软骨层明显变薄,软骨细胞减少,大小不等,簇集现象明显,排列紊乱,并可见灶性崩解、坏死,嗜酸性小体多见。潮线多数消失。假模组:软骨表面不光滑,可见缺损及骨赘形成。四层结构紊乱。软骨细胞部分呈灶性崩解、坏死,嗜酸性小体散在分布。部分软骨层增厚,表、中层细胞增多,排列紊乱,有簇状增生。潮线大部分不完整或出现双潮线。空白组:软骨表面光滑平整,表层、中间层、柱状细胞层及钙化层四层结构清晰。细胞大小一致,排列规整。潮线完整清晰。相关基因表达手法组Bcl-2表达(34.20±12.99)%,模型组(19.00±5.34)%(两组比较P<0.05差异有统计学意义);手法组Bax(5.94±4.58)%,模型组(35.88±26.35)%(两组比较P<0.01差异有统计学意义);手法组Fas(13.57±11.80)%,模型组(49.31±24.32)%(两组比较P<0.01差异有统计学意义),其余两两相互比较P>0.05,差异无统计学意义。  结论:揉髌手法通过上调Bcl-2,下调Bax、Fas基因表达减少兔膝关节软骨细胞凋亡,可能是延缓兔膝关节软骨组织退变的机制之一。
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