论文部分内容阅读
【目的】 1. 观察叉头蛋白O1（FoxO1）在痤疮皮损中表达。 2. 了解氯化钙、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、异维 A 酸对原代培养人角质形成细胞（KC）中FoxO1表达的作用。 3. 探讨FoxO1过表达或沉默对KC增殖、分化及凋亡的影响。 【方法】 1. 收集5例痤疮患者皮损及正常对照皮肤，免疫组化检测FoxO1、p-FoxO1表达。 2. 取3例正常人手术切除包皮，分离、培养KC。 3. 1.2 mM氯化钙处理KC 1 d~14 d；1~20 ng/ml IGF-1处理KC 10~120 min；0.1~10μM异维A酸处理KC 24 h。 4. 分别用重组FoxO1过表达腺病毒（Ad-HA-FoxO1）、FKHR shRNA慢病毒转染KC，上调或沉默KC中FoxO1表达。 5. 蛋白印迹检测FoxO1、Akt、内披蛋白等表达，BrdU ELISA法、流式细胞术分别检测细胞增殖、周期和凋亡。 6. Ad-HA-FoxO1转染人工皮肤EpiSkin，HE染色观察病理变化，免疫组化检测FoxO1、内披蛋白表达。 【结果】 1. 痤疮皮损中FoxO1、p-FoxO1表达：免疫组化显示痤疮皮损表皮中FoxO1染色强度低于正常皮肤，而p-FoxO1在痤疮皮损和正常皮肤中表达基本相似。 2. FoxO1对KC分化的影响：1.2 mM氯化钙呈时间依赖性上调FoxO1、内披蛋白表达，而p-FoxO1表达减少。FoxO1过表达促进FoxO1、p-FoxO1和内披蛋白表达，而FoxO1沉默下调FoxO1、内披蛋白表达。 3. FoxO1对KC增殖的影响：FoxO1过表达组吸光度明显低于空白和病毒对照组（P<0.05），而FoxO1沉默组吸光度明显高于空白和病毒对照组（P<0.05）。 4. FoxO1对KC细胞周期的影响：FoxO1过表达组G2/M期细胞比例明显高于空白对照组，但G0/G1期细胞比例明显减少（P<0.05）；FoxO1沉默组S期细胞比例明显高于空白（P<0.05）和病毒对照组（P<0.01），但 G2/M 期细胞比例减少（P<0.01）。 5. FoxO1对KC细胞凋亡的影响：FoxO1过表达组早期凋亡、晚期凋亡/坏死细胞比空白和病毒对照组明显增加（P<0.05-0.01），而FoxO1沉默组活细胞明显增加（P<0.05）。 6. Ad-HA-FoxO1感染人工皮肤：HE染色显示FoxO1过表达组表皮分层明显多于空白和病毒对照组。免疫组化染色发现FoxO1过表达组基底层出现FoxO1阳性染色，表皮全层均有内披蛋白强阳性表达。 7. IGF-1 对 KC 中 FoxO1 表达的影响：IGF-1 呈浓度和时间依赖性下调FoxO1、内披蛋白表达，上调p-Akt表达，而 p-FoxO1、Akt表达无明显变化。PI3K抑制剂LY294002预处理减少了IGF-1诱导的p-Akt、p-FoxO1表达，增加了 FoxO1、内披蛋白表达，而 Akt 表达无明显变化。此外，FoxO1 过表达上调IGF-1诱导的内披蛋白表达，而FoxO1沉默下调内披蛋白表达。 8. 异维 A 酸对 KC 中 FoxO1 表达的影响：异维 A 酸呈浓度依赖性上调FoxO1、p53、p21表达，下调p-FoxO1、内披蛋白表达。 【结论】 1. FoxO1低表达可能在痤疮发病中起一定作用。 2. FoxO1可通过诱导G2/M期阻滞和细胞凋亡，从而抑制KC增殖、促进终末分化。 3. IGF-1可通过PI3K/Akt通路抑制KC中FoxO1表达和终末分化。 4. FoxO1可能是异维A酸治疗痤疮的潜在靶点。