拟南芥CRK45的亚细胞定位及其对钙离子和糖处理的响应

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:huimin0609
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植物中的类受体蛋白激酶在调控植物的生长发育以及参与激素信号转导、非生物和生物胁迫响应等方面具有非常重要的作用。本研究以拟南芥野生型 Col-0、CRK45(At4g11890)基因的T-DNA插入突变体 crk45以及 CRK45过表达株系为实验材料,探讨了 CRK45基因对钙离子和糖处理的响应,并构建了 CRK45基因与荧光蛋白 YFP或 GFP融合的表达载体,转入拟南芥野生型后,观察了 CRK45蛋白的亚细胞定位。主要结果如下:  1.采用反式遗传学方法,经基因特异引物 PCR扩增和RT-PCR检测证实得到纯合的CRK45敲除系。  2.确定了外源钙离子可诱导拟南芥野生型中 CRK45基因的表达,且 CRK45基因的突变导致 CICBE基因对钙离子更加敏感。  3.初步确定 CRK45在葡萄糖介导的种子萌发抑制过程中具有正调控作用,且葡萄糖可以诱导拟南芥野生型中 CRK45的表达。  4.构建了 p35S::CRK45-YFP和p35S::4-CRK45-GFP两个表达载体,通过农杆菌介导法将其导入拟南芥野生型中,并获得了转基因纯合体植株。激光共聚焦显微镜下观察显示,融合蛋白的表达集中在植物细胞质中。
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