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目的缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)是围生期新生儿脑损伤最常见的原因,可引起脑瘫、癫痫、智力低下以及学习障碍等一系列中枢神经系统异常,并可能发生严重的神经系统后遗症,对其家庭及社会造成巨大且长期的影响。选择性的细胞坏死和凋亡是HIBD时神经细胞死亡的两种主要形式。坏死已被证实是HIBD后第一天内神经细胞的主要死亡形式,但在此期可见有大量细胞表现出凋亡早期的形态特征,提示凋亡机制已经启动。在HIBD后数天至数周神经细胞死亡形式以凋亡为主,凋亡持续发生在如大脑皮层等易受损伤的部位,产生迟发性细胞死亡加重脑损伤。因此,神经细胞凋亡是新生大鼠HIBD选择性神经细胞丢失的一种主要形式。已有大量的研究报道表明HIBD后神经细胞凋亡与时程密切相关,所以抑制凋亡治疗的疗效肯定也与治疗的时间窗有着紧密的关系。国内外大量实验证实在HIBD后早期进行HBO治疗可有效抑制神经细胞凋亡。很多研究从不同的角度阐述了HIBD后HBO治疗的最佳时间窗,目前大多数学者认为在损伤后2～24 h内开始HBO治疗是有效的,而延长HBO治疗的时间窗则效果不佳,甚至国外有研究发现在成年大鼠局灶性缺血后12 h开始HBO治疗会加重脑损伤。由于很多因素限制,临床上经常无法早期开始HBO治疗,因此研究延迟治疗时间窗是否仍可有效抑制神经细胞凋亡的发生可为临床上延迟时间窗开始HBO治疗提供理论依据,是很有实际意义的。本研究的主要目的是探讨HIBD后HBO治疗抑制神经细胞凋亡的最佳时间窗,以及延迟时间窗HBO治疗对神经细胞凋亡的影响。方法本研究采用7日龄Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为7组(n=8),即正常对照组(CON),缺氧缺血脑损伤组(HIBD),及高压氧治疗组(HBO),其中HBO组又根据HIBD后开始HBO治疗的不同时间分为2小时高压氧组(2H-HBO)、24小时高压氧组(24H-HBO)、48小时高压氧组(48H-HBO)、72小时高压氧组(72H-HBO)和96小时高压氧组(96H-HBO)等五个亚组,分别于HIBD后2 h、24 h、48 h、72 h和96 h开始给予HBO治疗。HBO治疗的条件均为2 ATA,稳压1 h,持续7天。待96H-HBO组HBO疗程结束(鼠龄18 d)时同期处死所有老鼠取脑组织后,常规脱水及石蜡包埋。采用TUNEL染色法检测各组大脑皮层神经细胞的凋亡情况。结果研究发现HIBD后2 h及24 h开始HBO治疗,均可有效抑制神经细胞凋亡发生。48 h、72 h和96 h开始HBO治疗,大脑皮层神经细胞凋亡数随着时间窗的延长逐渐增多,且3组之间差异有显著意义(P＜0.01)。结果提示,随着HBO治疗时间窗的延长,对神经细胞凋亡的抑制作用逐渐减弱。但延长时间窗的HBO治疗组与HIBD组相比凋亡细胞的数仍有明显减少,差异有显著意义(P＜0.01)。这一结果提示即使错过最佳治疗时间窗,时间窗延长的HBO治疗仍有部分抑制神经细胞凋亡的作用。结论1)HBO治疗抑制新生大鼠HIBD神经细胞凋亡的最佳时间窗在24 h内。2)HBO治疗抑制新生大鼠HIBD神经细胞凋亡的作用随着时间窗的延长而逐渐减弱。3)新生大鼠在HIBD后24h后开始HBO治疗,虽然抑制神经细胞凋亡的作用明显减弱,但也不会加重神经细胞凋亡。