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目的: 1.观察原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者和四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏Treg和Th17细胞平衡现象; 2.评价加味健脾补肾方对原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者和实验动物的药效及其对调节性T细胞(Treg)和Th17细胞的影响。 方法:本论文分为三部分。 第一部分:收集2010至2015年期间在上海中医药大学附属曙光医院住院PBC患者14例和慢性乙肝患者17例。观察2组患者的临床症状及体征、血清肝功能、γ球蛋白、免疫学指标、Child-Pugh分级、肝组织病理的Ishak病理分期及CD8、CK7、CK19、CD34、Foxp3和IL-17蛋白表达情况。 第二部分:选择2011年至2014年期间上海市曙光医院、中山医院和仁济医院门诊及住院的PBC患者。将所有患者分为两组，中西医结合组使用中药健脾补肾方+熊去氧胆酸(UDCA)治疗;单独使用UDCA治疗的患者为西药治疗组。健脾补肾方组成包括:党参15g、白术15g、茯苓15g、炙甘草15g、女贞子15g、旱莲草15g等，每日1剂，浓煎为200ml，分两次口服，2周为1疗程，根据患者病情在此方基础上加减变化。UDCA按13-15mg/(kg·d)剂量服用。2组患者每隔3个月复查1次血常规、肝功能、免疫学指标、腹部彩色多普勒超声检查，记录各项观察指标，连续随访1年，观察治疗前后两组患者的临床症状、体征和生化指标情况。 第三部分:40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、对照药UDCA组、健脾补肾方组和加味健脾补肾方组。使用CCl4溶液皮下注射给药进行动物造模，首次给予CCl4原液，后每次给予60％CCl4-橄榄油溶液，每周2天，1次/天，共4周。对照药UDCA组、健脾补肾方组和加昧健脾补肾方分别在第4周开始给予UDCA、健脾补肾方和加味健脾补肾方，第8周处死大鼠。测定大鼠肝功能。HE染色观察大鼠肝组织炎症情况，天狼星红染色观察大鼠肝组织纤维化情况。免疫组化法观察Foxp3和IL-17在肝组织中的表达。ELISA法测定大鼠血清IL-4和IL-17的表达。 结果: 第一部分: PBC患者肝组织见纤维化区域内见大量淋巴细胞、浆细胞及分叶核粒细胞浸润，胆管上皮细胞重度破坏，胆小管大量增生，偶见上皮样肉芽肿，纤维化区域内残留的肝细胞团水肿、变性;肝小叶内炎细胞浸润，灶区见淤胆;免疫组化显示内有CD8+T细胞浸润，CK7和CK19大量表达，偶有CD34表达。慢性乙肝患者肝组织见纤维化区域内见大量浆细胞及分叶核粒细胞浸润，胆管上皮细胞轻度破坏，胆小管轻度增生，肝细胞水肿、变性;肝小叶结构稍有紊乱，肝小叶内炎细胞浸润;免疫组化显示CD8+T细胞浸润，CK7和CK19少量表达，偶有CD34表达。2组患者Foxp3表达无明显差异(P＞0.05)，而PBC患者肝脏IL-17表达、IL-17/Foxp3比值高于慢性乙肝组(P＜0.01)。PBC组患者肝组织IL-17/Foxp3半定量积分比值与血清ALP、γ-GT和TBil呈正相关(P＜0.05)，而与血清ALT、AST、Alb、TBA和γ球蛋白无明显相关性(P＞0.05)。 第二部分:西药治疗组经1年治疗后ALT明显下降(P＜0.05)。中西医结合治疗组经1年治疗后ALT、AST、ALP和γ-GT均明显下降(P＜0.01)。与西药治疗组相比，中西医结合治疗组在血清γ-GT水平的降幅明显更大（P＜0.05），提示中西医结合治疗组疗效稍优于西药治疗组。 第三部分:与正常组相比，模型组大鼠血清ALP、TBA、TBil、ALT和AST明显升高(P＜0.05)，肝脏胶原沉积明显、α-SMA表达增多(P＜0.05)。与模型组相比，健脾补肾组血清ALP、TBA、TBil和ALT明显降低(P＜0.05);加味健脾补肾组血清ALP、TBA、TBil、ALT和AST明显降低（P＜0.05）;对照药UDCA组血清ALP明显降低(P＜0.05)，各用药组肝脏胶原沉积和α-SMA表达明显减少(P＜0.05)。与对照药UDCA组相比，健脾补肾组ALP和TBil明显降低(P＜0.05);加味健脾补肾组ALP、TBA和AST均明显降低(P＜0.05)。与健脾补肾组相比，加味健脾补肾组TBA、ALT和AST明显降低（P＜0.05）。 与正常组相比，模型组大鼠肝组织IL-17蛋白和基因表达明显增多(P＜0.05);与模型组相比，对照药UDCA组、健脾补肾组和加味健脾补肾组大鼠肝组织IL-17蛋白和基因表达明显降低(P＜0.05);各用药组大鼠肝组织IL-17蛋白和基因表达无明显差异（P＞0.05）。与正常组相比，模型组大鼠肝组织Foxp3基因表达减少(P＜0.05);与模型组相比，健脾补肾组大鼠肝组织Foxp3蛋白表达明显增高(P＜0.05);各用药组大鼠肝组织Foxp3蛋白和基因表达无明显差异(P＞0.05)。与正常组相比，模型组大鼠肝组织IL-17和Foxp3基因表达比值明显增高(P＜0.05);与模型组相比，对照药UDCA组、健脾补肾组和加味健脾补肾组大鼠肝组织IL-17和Foxp3蛋白和基因表达比值明显降低(P＜0.05);各用药组大鼠肝组织IL-17和Foxp3蛋白和基因表达比值表达无明显差异(P＞0.05)。与正常组相比，模型组大鼠血清IL-17含量明显增多(P＜0.05);与模型组相比，对照药UDCA组、健脾补肾组和加味健脾补肾组大鼠肝组织血清IL-17含量明显降低(P＜0.05);各用药组大鼠血清IL-17含量无明显差异(P＞0.05)。与正常组相比，模型组大鼠血清IL-4含量无明显变化(P＞0.05);与模型组相比，对照药UDCA组大鼠肝组织血清IL-4含量明显增高(P＜0.05)。与正常组相比，模型组大鼠血清IL-4和IL-17含量比值明显降低(P＜0.05);与模型组相比，对照药UDCA组、健脾补肾组和加味健脾补肾组大鼠肝组织血清IL-4和IL-17含量比值明显增高(P＜0.05);各用药组大鼠血清IL-4和IL-17含量比值无明显差异(P＞0.05)。 结论: 1.PBC患者肝脏内出现Treg和Th17细胞失衡现象，表现为肝脏内Th17细胞数量增多，而肝脏内Treg数量无变化。 2.加味健脾补肾方联合UDCA治疗能改善PBC患者的血清肝功能，且优于单用UDCA治疗的患者。 3.加味健脾补肾方能改善肝纤维化大鼠肝脏胆汁淤积，且能调节Treg和Th17细胞的失衡，下调肝脏内Th17细胞数量，抑制血清内IL-17的分泌。