【摘 要】
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构建了两类嵌合质粒用于分离水稻基因及其启动子，第一类质粒(p13A与p13B)是基于Ac/Ds结构，第二类质粒(p13GUS与p13GUS2)是基于T-DNA(GUS)结构。将四个质粒分别转化粳稻品种中花
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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构建了两类嵌合质粒用于分离水稻基因及其启动子，第一类质粒(p13A与p13B)是基于Ac/Ds结构，第二类质粒(p13GUS与p13GUS2)是基于T-DNA(GUS)结构。将四个质粒分别转化粳稻品种中花11的胚性愈伤组织，进行了水稻基因及其启动子捕获的探索，已取得的初步结果如下: 1.对转化了第一类质粒的转基因抗性愈伤组织和植株进行了GUS染色与分子检测，结果表明转化质粒p13A获得的496株转基因植株T0代中有327株(约66％)能检测到Ds发生了切离，其中157株有GUS染色，但大量Ds转座事件发生在转基因植株的体细胞中，观察到的GUS染色模式在整个植株中是不均一的、也不能稳定遗传。最终获得一株编号为M92转基因植株，它的Ds转座子整合位置上游的水稻基因启动子指导GUS基因的表达及表达的特性是可遗传的。对转化了p13B质粒获得的175个转基因株系中的18个独立转化株的T2代植株进行了抗除草剂筛选，从141个抗除草剂转基因植株中用PCR方法检测到其中37株是Ds因子发生了转座的植株、而且这种转座到新位置上的Ds因子是可遗传的，初步观察到其中5株的GUS染色呈阳性。 2.对转化第二类的两个质粒获得的942个独立转化株的T0代植株进行了各组织的GUS染色检测，共获得31个GUS阳性植株，其中12个阳性株中GUS报告基因的表达具有组织器官专一性。T1代的GUS组织化学染色显示除少数植株外，大部分仍然保持着原有的GUS染色特征，表明这种染色特征是可遗传的。对GUS染色阳性株系进行了抗性纯合株筛选、T-DNA插入拷贝数分析和旁邻序列分离。另外，将T0代没有检测到GUS表达的911个转基因植株，诱导出它们的愈伤组织，对胁迫处理和各种激素诱导处理前后的愈伤组织，进行组织化学染色，其中21个编号的愈伤组织在处理前后GUS染色发生变化。 实验结果表明，本研究所构建的捕获质粒可用于水稻基因及其启动子的分离，包括受环境胁迫及激素诱导表达的基因及其启动子。
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