TCDCA 对AA模型大鼠成纤维样滑膜细胞EP2/EP4-G蛋白-cAMP信号通路的影响

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牛磺鹅去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)是动物胆汁酸中具有生物活性的主要有效成分之一,对动物机体具有显著的抗炎作用。为深入探讨TCDCA的抗炎作用的分子机制,寻找TCDCA抗佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis, AA)作用的药理学基础,本课题以AA大鼠成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes, FLSs)为研究对象,研究TCDCA对EP2/EP4介导的信号转导通路的影响。主要研究内容包括:通过ELISA法检测TCDCA作用于AA大鼠成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes, FLSs)的量效关系曲线;采用实时荧光定量PCR技术检测AA大鼠FLSs内EP2/EP4基因的表达;采用Western blot技术检测AA大鼠FLSs内EP2/EP4和Gas/Gai蛋白的表达;采用ELIAS法检测FLSs内EP2/EP4-G蛋白-cAMP介导的信号转导通路内cAMP的含量。结果表明:TCDCA能够降低PGE2刺激后AA大鼠FLSs内cAMP的含量,且存在时间与剂量依赖性关系;与PGE2组比较,TCDCA (10-5~10-7mol/L)均可显著抑制PGE2刺激的AA大鼠FLSs内较高水平EP2、EP4 mRNA及蛋白的表达量;与Control组比较,PGE2可降低FLSs内Gαs蛋白的表达量,升高Gαi的表达量,与PGE2组比较,TCDCA (10-5~10-7mol/L)可显著促进PGE2刺激的FLSs内Gαs蛋白的表达,而抑制Gαi蛋白的表达。与Control组比较,EP2/EP4受体激动剂和PDE4抑制剂能显著的升高AA大鼠FLSs内cAMP含量,而EP2/EP4受体阻断剂、G蛋白阻断剂及AC抑制剂则显著的降低EP2/EP4受体激动剂处理后AA大鼠FLSs内cAMP含量。与EP2/EP4受体阻断剂+EP2/EP4受体激动剂组、G蛋白阻断剂+EP2/EP4受体激动剂组、AC抑制剂+EP2/EP4受体激动剂组比较,TCDCA对AA大鼠FLSs内cAMP的含量无显著性影响。与PDE4抑制剂+EP2/EP4受体激动剂组比较, TCDCA能显著的降低AA大鼠FLSs内cAMP含量。结论:TCDCA能通过抑制EP2/EP4-G蛋白-cAMP介导的信号转导通路而起到抗炎作用。
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