【摘 要】
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链霉菌(Streptomyces sp．)C3662是本实验室筛选到的能产生多种纤溶活性物质的菌株，本文报道了从其发酵液中纯化一种纤溶酶Sfp-1的方法，纤溶酶Sfp-1的理化及纤溶性质，并用反向遗传
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链霉菌(Streptomyces sp．)C3662是本实验室筛选到的能产生多种纤溶活性物质的菌株，本文报道了从其发酵液中纯化一种纤溶酶Sfp-1的方法，纤溶酶Sfp-1的理化及纤溶性质，并用反向遗传学及鸟枪克隆等两种方法对编码纤溶酶基因的克隆与表达进行了探索。 链霉菌C3662的发酵液经硫酸铵分级盐析，DEAE-Sepharose阴离子交换层析和CM-Sepharose阳离子交换层析分离后纯化获得了一种纤溶酶Sfp-1。经HPLC检测其纯度为93.25％，SDS-PAGE显示为单一的条带，分子量约为25kD。 测定纤溶酶Sfp-1的N末端氨基酸序列为Val-Val-Gly-Gly-Thr-Arg-Ala-Ala-Gln-Gly-Glu-Phe。Sfp-1在4-37℃温度范围和pH4-9的酸碱范围内稳定性良好，其最适温度为37℃，最适pH为7.5。Sfp-1的活性可被10mmol／L的PMSF所抑制，而不被EDTA抑制，表明Sfp-1纤溶酶可能是一种丝氨酸蛋白酶，而不是金属蛋白酶。 在不含纤溶酶原的纤维蛋白平板上，Sfp-1也具有纤溶活性，表明Sfp-1可以直接降解纤维蛋白，是一种蛋白水解酶，而非纤溶酶原激活剂。血小板凝集实验显示Sfp-1可在体外阻止血小板聚集，具有很好的抗凝活性。小白鼠尾静脉注射Sfp-1的急性毒理实验显示其毒性极低。 根据Sfp-1的N末端序列设计了一组同义寡聚核苷酸序列作为探针GTC(G)TGCGGCGGCACG(C)CGC(G)GCC(G)GCC(G)CAG(C)GGC，用这一
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